Mir-18a在nitrofen誘導(dǎo)大鼠CDH模型中表達(dá)及作用的研究.pdf

1、目的：
　　本研究的目的旨在構(gòu)建Nitrofen誘導(dǎo)的大鼠先天性膈疝（CDH）模型，利用這一模型探討mir-17-92家族（包括miR-17-5p，miR-18a，miR-19b，miR-20a and miR-92）的表達(dá)變化，并對miR-18a的靶基因結(jié)締組織生長因子（CTGF）的表達(dá)差異進(jìn)行分析，同時(shí)通過在體外大鼠肺上皮細(xì)胞（RLE-6TN）中過表達(dá)mir-18a以及抑制 mir-18a表達(dá)，分析其對 CTGF的調(diào)控作用，進(jìn)

2、一步研究 mir-18a在CDH肺發(fā)育不良的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮的作用。
　　材料/方法：
　　SPF級大鼠懷孕后隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組兩組，并于懷孕后9.5天分別給予nitrofen和橄欖油灌胃。孕后21.5天剖腹產(chǎn)取出胎鼠并提取胎肺組織。利用熒光定量 PCR技術(shù)、蛋白印記雜交技術(shù)、免疫組化技術(shù)分別觀察兩組胎肺中mir-17-92家族以及mir-18a的靶基因結(jié)締組織生長因子（CTGF）的表達(dá)差異。體外培養(yǎng)大鼠肺上皮細(xì)胞（RLE

3、-6TN），分為對照組、陰性對照組、mir-18a模擬物組以及mir-18a抑制物組，轉(zhuǎn)染mir-18a模擬物（mimics）,mir-18a抑制物（inhibitor）到對應(yīng)組別中，觀察轉(zhuǎn)染后mir-18a的靶基因CTGF的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　與對照組相比，mir-18a在nitrofen誘導(dǎo)CDH組胎肺中的表達(dá)顯著上調(diào)，mir-17-92家族其它基因無明顯表達(dá)差異，mir-18a的靶基因CTGF在nitrofen

4、誘導(dǎo) CDH組胎肺中的表達(dá)顯著下降。在大鼠肺上皮細(xì)胞（RLE-6TN）中過表達(dá)mir-18a后，CTGF表達(dá)明顯下降。
　　結(jié)論：
　　本文通過構(gòu)建 niteofen誘導(dǎo)大鼠 CDH模型以及大鼠肺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染，對MiRNA的表達(dá)變化及在CDH肺發(fā)育不良中的作用進(jìn)行了探討。通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)mir-18a在niteofen誘導(dǎo)的大鼠CDH胎肺中的表達(dá)明顯上調(diào)，通過大鼠肺上皮細(xì)胞過表達(dá)mir-18a我們發(fā)現(xiàn)mir-18a對其靶基因