結(jié)核分枝桿菌19KD-ESAT6融合蛋白的克隆表達(dá)及血清學(xué)診斷研究.pdf

1、目的：構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌19KD—ESAT6融合蛋白的重組質(zhì)粒，在大腸埃希菌中表達(dá)純化后檢測其抗原性，研究該蛋白在結(jié)核病血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價值。 方法：運(yùn)用PCR技術(shù)從結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv中擴(kuò)增獲得19KD和ESAT6基因片段，將目的片段分別克隆到pMD18—T載體，再亞克隆目的片段到同一表達(dá)載體pET21a，構(gòu)建重組表達(dá)載體pET21a-19KD—ESAT6，轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21（DE3），表達(dá)純化后用Western

2、 blot法分析其抗原反應(yīng)性。建立間接ELISA方法，檢測161例臨床血清標(biāo)本。 結(jié)果：成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET21a-19KD—ESAT6，并在大腸埃希菌中獲得高效表達(dá)。SDS—PAGE結(jié)果顯示，在約29KD處有表達(dá)條帶。Western blot結(jié)果表明融合蛋白19KD—ESAT6與確診的結(jié)核病患者血清發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。以融合蛋白19KD—ESAT6為包被抗原建立間接ELISA法，70例臨床確診的肺結(jié)核患者中28例陽性，敏感性