戊地昔布與吡柔比星體外聯(lián)合對人肺癌作用和機制.pdf

1、目的:觀察戊地昔布與阿霉素聯(lián)合應(yīng)用對人肺癌A549細胞系的抑制效應(yīng),并初步探討其作用機制。
　　 方法:用MTT法檢測化療藥物對人肺癌A549細胞系的抑制率；FCM(流氏細胞術(shù))檢測腫瘤細胞周期分布、細胞凋亡率和凋亡蛋白表達。
　　 結(jié)果:
　　 一.戊地昔布和吡柔比星單用或合用對A549細胞生長的抑制作用。
　　 1.戊地昔布和吡柔比星單獨或聯(lián)合用藥可時間和濃度依賴性抑制A549細胞的生長。
　　

2、 吡柔比星在6.3μmol/L-100μmol/L的藥物濃度范圍內(nèi),應(yīng)用24h后抑制率是7.2％-37.5％,用藥后48h,抑制率增加到11.1％-59.2％,用藥后72h,抑制率增加到16.3％-71.9％,隨時間的延長和濃度的增加,抑制率明顯增加。在用藥24h、48h和72h后的IC50分別是182μmol/L、62μmol/L和35μmol/L,隨時間延長明顯減小。
　　 戊地昔布在19μmol/L-300μmol/L的

3、藥物濃度范圍內(nèi),24h后抑制率是6.5％-32.0％,用藥后48h時抑制率增加到9.3％-49.4％,72h時抑制率增加到15.9％-68.8％,隨時間的延長和濃度的增加,抑制率明顯增加。在用藥24h、48h和72h后的IC50分別是838μmol/L、290μmol/L和134μmol/L,隨時間延長明顯減小。
　　 聯(lián)合應(yīng)用戊地昔布和吡柔比星后,用藥后24h抑制率是9.9％-48.5％,用藥后48h時抑制率增加到24.0％-

4、82.3％,72h時抑制率增加到31.6％-92.1％,隨時間的延長和濃度的增加,抑制率明顯增加。聯(lián)合用藥24h后,戊地昔布的IC50從單用的838μmol/L降低到合用的300μmol/L,降低了64.1％。吡柔比星的IC50從單用的182μmol/L降低到100μmol/L,降低了45.1％。聯(lián)合用藥48h后,戊地昔布的IC50從單用的290μmol/L降低到合用的72μmol/L,降低了75.2％。吡柔比星的IC50從單用的62μ

5、mol/L降低到24μmol/L,降低了61.3％。聯(lián)合用藥72h后,戊地昔布的IC50從單用的134μmol/L降低到合用的36μmol/L,降低了73.1％。吡柔比星的IC50從單用的35 uμmol/L降低到12μmol/L,降低了65.7％。無論是戊地昔布還是吡柔比星在合用后其IC50均明顯降低。
　　 2、戊地昔布和吡柔比星聯(lián)合用藥時的合用指數(shù)(CI)
　　 合用24h、48和72h后,兩種藥物的合用指數(shù)在抑制

6、率從0.1到0.9時均小于1,兩種藥物之間是協(xié)同作用。
　　 3、戊地昔布和吡柔比星用藥時間先后次序依賴關(guān)系
　　 戊地昔布和吡柔比星同時用藥的抑制率最高,其次是先用吡柔比星再用戊地昔布,抑制率最低者是先用戊地昔布后再用吡柔比星。
　　 4、戊地昔布和吡柔比星合用不同藥物濃度依賴關(guān)系
　　 25μmol/L吡柔比星和19μmol/L戊地昔布合用,合用指數(shù)為1.06,5μmol/L戊地昔布與6.3μmol/

7、L合用,合用指數(shù)為1.15,略呈拮抗作用。除此以外,兩者合用指數(shù)大于均小于1,呈協(xié)同作用
　　 5、藥物對細胞周期和凋亡率的影響
　　 對照組各期比例分別為:G0/G1期53.5％,G2/M期20.2％,S期26.3％。對照組凋亡率為6.7％。應(yīng)用75μmol/L戊地昔布48 h后,G2/M期的細胞比例降低到17.8％,G0/G1期的細胞比例降低到60.8％,S期的細胞比例升高到21.4％,凋亡率提高到11.6％。應(yīng)用2

8、5μmol/L吡柔比星48h后,G2/M期的細胞比例降低到13.7％,G0/G1期的細胞比例降到36.6％,S期的細胞比例升高到49.8％,凋亡率提高到22.3％。戊地昔布和吡柔比星二者聯(lián)合應(yīng)用后,G2/M期的細胞比例降低到16.5％,G0/G1期的細胞比例降到47.4％,S期的細胞比例升高到36.1％,凋亡率明顯提高到30.8％。
　　 6、藥物對Bcl-2、Bax和caspase-3的影響
　　 應(yīng)用75μmol/L

9、戊地昔布48 h后,Bcl-2的熒光指數(shù)降為0.94,但無統(tǒng)計學(xué)意義。Bax的熒光指數(shù)升高到1.19,Caspase-3的熒光指數(shù)升高到1.15。戊地昔布引起的凋亡主要與Bax和Caspase-3有關(guān)。應(yīng)用25μmol/L吡柔比星48 h后,Bcl-2的熒光指數(shù)降為0.91,Bax的熒光指數(shù)升高到1.18,Caspase-3的熒光指數(shù)升高到1.19,均有統(tǒng)計學(xué)意義。吡柔比星引起的凋亡主要與Bcl-2、Bax.和Caspase-3都有關(guān)。

10、戊地昔布和吡柔比星二者聯(lián)合應(yīng)用后,Bcl-2的熒光指數(shù)降為0.89,Bax的熒光指數(shù)升高到1.22,Caspase-3的熒光指數(shù)升高到1.21,均有統(tǒng)計學(xué)意義。戊地昔布和毗柔比星二者聯(lián)合應(yīng)用后,Bcl-2表達進一步減少、Bax和Caspase-3表達進一步增多。
　　 結(jié)論:
　　 1、戊地昔布和吡柔比星單獨和聯(lián)合用藥可時間和濃度的依賴性抑制A549細胞的生長,均呈協(xié)同作用。
　　 2、不同用藥次序也影響藥物聯(lián)合