LPAR3、COX-2和VEGF蛋白在反復移植失敗患者著床期子宮內膜表達的研究.pdf

1、背景及意義:
　　三十年來，體外受精一胚胎移植(invitrofertilizationandembryotransfer，IVF-ET)技術飛速發(fā)展。胚胎質量和子宮內膜容受性是助孕技術成功與否的兩大關鍵因素。隨著胚胎實驗室技術的日趨完善和臨床超促排卵方案的不斷優(yōu)化，胚胎質量得到很大提高。但胚胎移植成功率仍然徘徊在一個較低的水平。因此，子宮內膜容受性的問題日趨受到重視。子宮內膜容受性指子宮內膜在較短時期內對胚胎具有一個接受能力，這

2、通常發(fā)生月經(jīng)周期的第19～24天，稱為“種植窗期”。有報道稱超過半數(shù)的移植失敗是由于子宮內膜容受性降低導致。多數(shù)學者認為，既往周期中移植次數(shù)超過3次或者移植優(yōu)質胚胎總數(shù)大于10個仍未能成功妊娠，被稱為胚胎反復移植失敗(RIF)。目前，對RIF的研究主要集中在子宮內環(huán)境，卵巢分泌的甾體激素，自身免疫，輸卵管因素以及心理因素等方面導致的子宮內膜容受性缺陷上，但是至今仍無法有效解決反復移植失敗這一臨床問題。反復移植失敗給患者帶來巨大的經(jīng)濟壓力

3、和精神壓力。
　　子宮內膜容受性的建立是由一系列甾體激素、黏附蛋白、細胞因子協(xié)同作用的結果。近年來，有學者發(fā)現(xiàn)胚胎種植過程與腫瘤細胞侵襲轉移極為相似。溶血磷脂酸(Lysophosphatidicacid，LPA)具有生長因子樣作用，可以特異性結合靶器官上的受體，發(fā)揮多重生物學效應。在已知的6種受體中，LPAR3受體與雌性生殖最為密切相關，主要存在于女性卵巢、胎盤、子宮內膜等組織。有研究通過敲除雌性小鼠LPAR3基因，發(fā)現(xiàn)子宮內膜前

4、列腺素、環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)的表達均降低，同時出現(xiàn)胚胎種植延遲，在給予外源性前列腺環(huán)素類藥物后，雌小鼠胚胎種植延遲得以改善，這提示LPAR3-COX2-PGS下游信號途徑調節(jié)胚胎種植。國內亦有研究發(fā)現(xiàn)LPAR3在整個女性月經(jīng)周期子宮內膜上均有表達。而與子宮內膜血管化關系最密切的調節(jié)因子血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)受COX-2合成的PG

5、s調控。PGE2可以通過雌孕激素受體激活相關蛋白和轉錄因子，上調VEGF的表達。胚胎著床部位子宮內膜血管網(wǎng)的建立和子宮內膜蛻膜化的發(fā)生，是囊胚得以成功黏附的重要條件。那么反復移植失敗患者著床期子宮內膜中LPAR3、COX-2和VEGF表達如何，是否與此類患者子宮內膜容受性受損有關，本課題將就這一問題進行初步研究。
　　本實驗選取鄭大一附院生殖中心反復移植失敗患者為研究對象，通過研究其子宮內膜種植窗期LPAR3、COX-2、VEGF

6、蛋白的表達和相關性，為研究子宮內膜容受性提供理論依據(jù)，以改善RIF患者臨床妊娠率。
　　研究目的:
　　通過檢測LPAR3、COX-2和VEGF在RIF患者種植窗期子宮內膜上的定位與表達，探索反復移植失敗患者子宮內膜容受性受損的機制，為改善子宮內膜容受性提高胚胎種植率提供理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　選取2014年1月至2014年3月期間即將在鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖中心接受IVF-ET/ICSI-ET/Th

7、aw-ET助孕患者，選取有助孕妊娠史擬再次助孕者為對照組，選取3個及以上周期均有優(yōu)質胚胎移植或移植大于等于10枚優(yōu)質胚胎仍未妊娠者為實驗組，納入標準(1)基礎內分泌正常(2)月經(jīng)規(guī)律，28～35天(3)近3個月內未使用甾體激素(4)宮腔鏡等輔助檢查證實宮腔形態(tài)正常，無子宮畸形、內膜息肉等(5)無染色體疾病、無免疫性疾病、非傳染病活動期等。符合納入標準的患者均于月經(jīng)第21～22天擬建病例日抽取血清孕酮值(P)，確定其處于黃體期后行內膜活檢

8、，內膜活檢日空腹抽取血清雌二醇(E2)，并測量子宮內膜厚度。收集內膜后，部分標本投入95％酒精送常規(guī)病理，剩余標本分為兩份，一份用于4％多聚甲醛固定，行免疫組化檢測，一份用生理鹽水沖洗后立即置入-80℃冰箱冷凍保存，行westernblot。數(shù)據(jù)分析采用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件。
　　結果:
　　1.免疫組化結果顯示，LPAR3、COX-2及VEGF在兩組種植窗期子宮內膜中均有表達，表達部位以子宮內膜腺上皮細胞為主，LPA

9、R3、COX-2還在子宮內膜腔上皮及部分基質細胞中有表達，而VEGF則在部分表達在間質細胞和血管內皮細胞包漿中。三者的平均光密度值比較，RIF組顯著低于對照組，有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。
　　2.Westernblot結果顯示，兩組內膜中均檢測到LPAR3、COX-2和VEGF，但在RIF組的表達顯著小于對照組，差異有顯著統(tǒng)計學意義（LAR3:0.354±0.053VS0.279±0.041,P＜0.01;COX-2:0.

10、571±0.087VS0.165±0.022,P＜0.01;VEGF:0.627±0.096VS0.313±0.045,P＜0.01)。
　　結論:
　　1.LPAR3在著床期子宮內膜上的表達部位和特點與反應子宮內膜容受性的VEGF一致，可作為潛在的預測子宮內膜容受性的標志物。
　　2.LPAR3、COX-2及VEGF在RIF患者著床期子宮內膜中表達均下降，提示RIF患者子宮內膜容受性降低，這可能是胚胎反復種植失敗的原