MiR156家族基因在柑橘階段發(fā)育以及成花調(diào)控中的作用.pdf

1、MicroRNAs包括了miRNAs和siRNAs，是一類由21-24個(gè)堿基構(gòu)成的具有保守結(jié)構(gòu)域的非編碼RNA。MicroRNAs在動(dòng)植物中廣泛存在且對(duì)其生長(zhǎng)和發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。MicroRNAs主要是通過(guò)靶定下游的相關(guān)基因，影響其轉(zhuǎn)錄后水平的表達(dá)來(lái)調(diào)控植物體的一系列生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。miR156是一種古老的MicroRNAs，在植物體中miR156具有高度保守的結(jié)構(gòu)域。大量研究表明，miR156通過(guò)靶定SQUAMOSA-promot

2、er binding-like(SPL)轉(zhuǎn)錄因子在植物的階段發(fā)育和成花轉(zhuǎn)變時(shí)期起到重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到了枳屬中miR156的三個(gè)前體序列，分別是PtmiR156a、PtmiR156b和PtmiR156c。本研究分離了柑橘不同種屬的3個(gè)miR156家族基因，并進(jìn)行了序列分析。同時(shí)，采用STTM的方法構(gòu)建了三個(gè)基因的干涉載體，轉(zhuǎn)化普通枳和伏令夏橙愈傷，初步探究其在柑橘階段發(fā)育和成花轉(zhuǎn)變中所起的作用。得到結(jié)果如下:<

3、br>　　1.在甜橙、普通枳和早實(shí)枳中分別克隆miR156家族基因，通過(guò)測(cè)序比對(duì)分析，其核心序列沒(méi)有變化，而側(cè)翼序列僅有個(gè)別堿基變化;通過(guò)對(duì)擬南芥、水稻和甜橙中miR156家族基因的克隆分析可知，在不同物種間，miR156的核心序列同源性很高而側(cè)翼序列差別較大。這一結(jié)果表明:miR156家族基因在物種間的廣泛存在且高度保守。
　　2.分別提取普通枳和早實(shí)枳不同年齡時(shí)期葉片以及成熟花器官的RNA，通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)了

4、miR156家族基因在營(yíng)養(yǎng)階段和成花轉(zhuǎn)變時(shí)期的表達(dá)量變化。結(jié)果表明:miR156家族基因在幼嫩葉片中表達(dá)很高，隨著葉齡的增加而逐漸減少;而在成熟花器官的各部位中表達(dá)差異較大，表明miR156參與了年齡途徑和成花轉(zhuǎn)變，并在其中起到重要的調(diào)控作用。
　　3.采用了Short Tandem Target Mimic(STTM)的方法成功構(gòu)建了35S∷PtmiR156a、156b、156c的干涉載體，轉(zhuǎn)化普通枳和伏令夏橙愈傷，初步探究mi