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1、葉酸受體α(FOLR1)是細(xì)胞攝取葉酸的高親和性受體,課題組前期研究發(fā)現(xiàn)FOLR1的表達(dá)與鼻咽癌的發(fā)生及紫杉醇耐藥表型密切相關(guān),而FOLR1引起的鼻咽癌紫杉醇耐藥表型似乎與其具有葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)的功能無關(guān)。本文將以鼻咽癌親本細(xì)胞系和紫杉醇耐藥細(xì)胞系為研究對象,從蛋白質(zhì)之間的相互作用為切入點(diǎn),探索FOLR1的作用通路與鼻咽癌紫杉醇耐藥之間的相關(guān)性。首先以FOLR1多克隆抗體為誘餌通過免疫共沉淀技術(shù)篩選其相互作用蛋白,初步確定了在鼻咽癌紫杉醇耐藥細(xì)
2、胞中FOLR1的相互作用蛋白——角蛋白17(Cytokeratin17,CK17),接著用免疫共沉淀、Western Blot、免疫熒光共定位等技術(shù)鑒定相互作用蛋白質(zhì),確定在鼻咽癌親本細(xì)胞和紫杉醇耐藥細(xì)胞中FOLR1與CK17存在功能上的蛋白質(zhì)間相互作用。通過生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)分析相互作用蛋白的作用機(jī)制,分析FOLR1可能的作用通路,發(fā)現(xiàn)二者之間有一個共同的相互作用蛋白——泛素C(ubiquitin C,UBC),二者的相互作用蛋白涉及細(xì)胞
3、分化、細(xì)胞周期、DNA修飾、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。然后再通過siRNA干擾技術(shù)沉默F(xiàn)OLR1或CK17,檢測作用通路分子的活化情況,發(fā)現(xiàn)沉默F(xiàn)OLR1基因,CK17在轉(zhuǎn)錄與蛋白水平表達(dá)均下調(diào),而沉默CK17基因,F(xiàn)OLR1的表達(dá)無變化,分析FOLR1引起的鼻咽癌紫杉醇耐藥表型可能通過FOLR1與CK17間的相互作用這條作用通路,而二者間的相互作用可能通過UBC起作用。我們推斷鼻咽癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中FOLR1表達(dá)的增高,可能是通過蛋白質(zhì)的相互作
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