低強度脈沖超聲波聯(lián)合骨形成蛋白2對人牙周膜細(xì)胞成骨誘導(dǎo)效應(yīng)的研究.pdf

1、近年來將外源性生長因子應(yīng)用于牙周組織以促進(jìn)牙周組織再生的生物學(xué)效應(yīng)受到廣泛的研究和關(guān)注。骨形成蛋白2(bonemorphogenetic protein2，BMP-2)是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞成骨的蛋白，研究證實其作為一種生長因子具有促進(jìn)細(xì)胞成骨以及成牙骨質(zhì)的作用。在一定條件下，它可誘導(dǎo)牙周膜細(xì)胞(human periodontalligament cells，hPDLCs)中的未分化間充質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞和成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化，對HPDLCs的骨向分

2、化誘導(dǎo)作用也已經(jīng)較明確。低強度脈沖超聲波(low intensity pulsedultrasound，LIPUS)作為一種物理治療手段，能夠促進(jìn)牙周軟硬組織修復(fù)、細(xì)胞增殖與分化、鈣鹽的沉積以及刺激膠原的分泌與合成。對長骨骨折的修復(fù)也具有顯著的促成骨效應(yīng)。本實驗組在前期實驗也證實LIPUS對hPDLCs的骨向分化具有促進(jìn)作用。
　　因此，本研究首次將低強度脈沖超聲波與骨形成蛋白2聯(lián)合引入誘導(dǎo)hPDLCs成骨分化以觀察其成骨效應(yīng)，探

3、討將LIPUS與BMP-2聯(lián)合引入牙周組織再生治療的可行性并提供實驗依據(jù)。
　　目的:
　　1.體外培養(yǎng)hPDLCs。
　　2.建立hPDLCs的LIPUS體外輻照模型。
　　3.探討在一定濃度BMP2蛋白誘導(dǎo)下對hPDLCs合成分泌堿性磷酸酶的影響。
　　4.觀察LIPUS與BMP-2聯(lián)合使用對成骨相關(guān)基因OPN、col-1表達(dá)的影響，為將其聯(lián)合使用以促牙周組織再生治療奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法:

4、r>　　1.使用組織塊法以及酶消化法和組織塊相結(jié)合法進(jìn)行hPDLCs的原代培養(yǎng)傳代獲得有限細(xì)胞系。并鑒定細(xì)胞來源為下一步研究提供細(xì)胞。
　　2.LIPUS輻照參數(shù)根據(jù)前期實驗[4]所檢測到的成骨最適參數(shù):輸出強度90mW/cm2，作用時間20min/day。
　　3.將第4代hPDLCs消化后按1×105/ml后接種于接種于六孔板中，將BMP-2配制為濃度分別是50、100、200、400ug/L四個濃度組，將四個濃度的BM

5、P-2溶液加入六孔板中連續(xù)作用于HPDLCs，9天后檢測各實驗組堿性磷酸酶活性并遴選出本實驗條件下最適宜的誘導(dǎo)濃度。
　　4.采用第五代hPDLCs，LIPUS按90mW/cm2-20min/d、200ug/LBMP2誘導(dǎo)液誘導(dǎo)7天后，檢測各組ALP活性以及PCR檢測牙周膜細(xì)胞成骨基因OPN、Col-Ⅰ的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.本實驗體外培養(yǎng)的hPDLCs經(jīng)免疫組化證實所培養(yǎng)細(xì)胞來源于中胚層。
　　2.經(jīng)BM

6、P-2誘導(dǎo)后，各濃度組ALP活性較對照組均有不同程度提高，其中200ug/L組改變最為明顯。
　　3.以90mW/cm2-20min/d LIPUS輻照處理以及聯(lián)合200ug/LBMP-2誘導(dǎo)HPDLCs7d后，成骨基因OPN、Col-Ⅰ的表達(dá)均有不同程度增強、各實驗組ALP活性也不同程度增強。
　　結(jié)論:
　　1.不同濃度的BMP-2對hPDLCs骨向分化具有促進(jìn)作用，本實驗條件下較適宜作用濃度為200ug/L.