針刺對缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞CaMKⅡ信號傳遞作用的影響.pdf

1、急性心肌梗死病情危重，早期再灌注是挽救缺血瀕危心肌的必要條件。然而，大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察發(fā)現(xiàn)，在成功恢復(fù)心臟血流后，部分心肌不僅未能得到恢復(fù)，反而出現(xiàn)功能、結(jié)構(gòu)、代謝上的損傷，最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死、凋亡和心力衰竭，造成心肌的缺血再灌注損傷。缺血、缺氧導(dǎo)致能量代謝障礙是細(xì)胞內(nèi)Ca2+增高的重要原因，晚期心肌細(xì)胞膜和肌漿網(wǎng)膜通透性改變，使細(xì)胞發(fā)生Ca2+超載并引發(fā)了不可逆損傷。
　　鈣調(diào)素依賴蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）是細(xì)胞內(nèi)鈣的重要

2、生理靶位，是參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵酶，CaMKⅡ活性的變化導(dǎo)致Ca2+穩(wěn)態(tài)平衡失調(diào)及細(xì)胞凋亡的發(fā)生。本研究在以往研究的基礎(chǔ)上，觀察了針刺手厥陰經(jīng)穴對大鼠缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞CaMKⅡ蛋白含量、CaMKⅡmRNA表達(dá)水平及心肌細(xì)胞凋亡等的影響，探討針刺對CaMKⅡ信號通路作用機(jī)制，為今后臨床研究提供理論依據(jù)。
　　目的：本研究以大鼠心電圖為基礎(chǔ)，觀察電針手厥陰經(jīng)“內(nèi)關(guān)”、“郄門”穴在缺血再灌注損傷過程中對大鼠血清hs-CRP、

3、心肌組織內(nèi)CaMKⅡ蛋白含量、CaMKⅡmRNA表達(dá)水平及心肌細(xì)胞凋亡的影響，闡明針刺的作用、CaMKⅡ與心肌細(xì)胞凋亡間的關(guān)系。
　　方法：Wistar大鼠70只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血-再灌注模型Ⅰ組、缺血-再灌注模型Ⅱ組、針刺“內(nèi)關(guān)”治療組、針刺“郄門”治療組、針刺“合谷”對照組和CaMKⅡ抑制劑組。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，CaMKⅡ抑制劑組在造模前尾靜脈注射CaMKⅡ抑制劑KN-93(1μmol/L)（0.075ml/

4、10g），其余各組制備缺血-再灌注模型，其中3個(gè)針刺穴位組分別為電針大鼠“內(nèi)關(guān)”穴、“郄門”穴和“合谷”穴20min，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支40min，心電圖監(jiān)測，而后再次電針上述穴位20min，松扎，恢復(fù)冠脈灌流。假手術(shù)組于穿線后100min、模型組和各針刺穴位組于再灌注后60min，腹腔靜脈取血并摘取心臟，觀察心電圖 ST段的變化情況及血清 hs-CRP的含量；熒光免疫組化法觀察 CaMKⅡ蛋白的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量（RTFQ）PCR法

5、分析CaMKⅡmRNA的表達(dá)率；TUNEL法觀察心肌細(xì)胞凋亡率。全部數(shù)據(jù)用SAS8.2統(tǒng)計(jì)軟件由專業(yè)人員進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1．心電圖監(jiān)測結(jié)果分析，與模型Ⅰ組比較，模型Ⅱ組、“合谷”組STⅡ值均無明顯差異（P＞0.05），“內(nèi)關(guān)”組、“郄門”組和CaMKⅡ抑制劑組有顯著差異（P＜0.01）；“郄門”組和CaMKⅡ抑制劑組STⅡ值變化與“內(nèi)關(guān)”組無明顯差異（P＞0.05）。
　　2．與假手術(shù)組比較模型組和針刺“合

6、谷”組血清hs-CRP含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），與模型Ⅰ組比較，模型Ⅱ組、針刺“合谷”組均無明顯差異（P＞0.05），針刺“內(nèi)關(guān)”組、針刺“郄門”組和CaMKⅡ抑制劑組血清hs-CRP含量有顯著差異（P＜0.01）；“內(nèi)關(guān)”組血清 hs-CRP含量要明顯低于模型組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3．CaMKⅡ平均光密度值檢測顯示，與假手術(shù)組比較，其余各組均有不同程度的升高，其中以模型組最高

7、，差異非常顯著（P＜0.01）。模型組與“合谷”組CaMKⅡ平均光密度值無明顯差異（P＞0.05），但與“內(nèi)關(guān)”組、“郄門”組和CaMKⅡ抑制劑組差異明顯（P＜0.01）；“內(nèi)關(guān)”組CaMKⅡ平均光密度值高于假手術(shù)組而低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；“內(nèi)關(guān)”組與“郄門”組、抑制劑組比較無明顯差異（P＞0.05）。
　　4．RTF-QRCR檢測CaMKⅡmRNA結(jié)果顯示，模型Ⅰ組、模型Ⅱ組、“合谷”組大鼠心肌組織 Ca

8、MKⅡmRNA含量下降明顯，三組比較無明顯差異（P＞0.05）?！皟?nèi)關(guān)”組、“郄門”組及CaMKⅡ抑制劑組較模型Ⅰ組大鼠心肌組織CaMKⅡmRNA含量明顯下降（P＜0.01）。與“內(nèi)關(guān)”組相比，模型組、對照組大鼠心肌組織CaMKⅡmRNA含量明顯升高（P＜0.01），抑制劑組CaMKⅡmRNA含量低于“內(nèi)關(guān)”組，差異明顯（P＜0.01）?！皟?nèi)關(guān)”組與“郄門”組含量無明顯差異（P＞0.05）。
　　5．與假手術(shù)組比較，模型組和“合谷

9、”組心肌細(xì)胞凋亡率均明顯升高（P＜0.01）。針刺“內(nèi)關(guān)”組、針刺“郄門”組和CaMKⅡ抑制劑組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率明顯低于模型Ⅰ組（P＜0.01），“合谷”組大鼠心肌細(xì)胞明顯高于模型Ⅰ組（P＜0.01）；“內(nèi)關(guān)”組心肌細(xì)胞凋亡率明顯低于模型組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；“郄門”組和抑制劑組心肌細(xì)胞凋亡率與“內(nèi)關(guān)”組無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．針刺手厥陰經(jīng)穴可有效降低hs-CRP的含量，說

10、明針刺可有效抑制缺血-再灌注進(jìn)程。
　　2．針刺“內(nèi)關(guān)”、“郄門”治療組及CaMKⅡ抑制劑組大鼠心肌組織CaMKⅡ均為低表達(dá)，針刺“合谷”組呈現(xiàn)高表達(dá)，說明針刺在減輕Ca2+超載過程中，抑制了CaMKⅡ的表達(dá)。
　　3．針刺手厥陰經(jīng)穴“內(nèi)關(guān)”組、“郄門”組心肌細(xì)胞CaMKⅡmRNA表達(dá)率明顯下調(diào)，與減少心肌細(xì)胞CaMKⅡ蛋白含量的研究相一致，表明了針刺減輕心肌缺血-再灌注損傷的作用。
　　4．TUNEL結(jié)果顯示，“內(nèi)關(guān)