CpG ODN1826對(duì)小鼠放射性肺損傷作用研究.pdf

1、肺癌是世界上許多國(guó)家常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，已經(jīng)成為人類(lèi)因腫瘤致死的首位病因。放射治療是肺癌治療的重要手段之一，但目前的臨床療效不是很理想，主要原因包括肺癌細(xì)胞放射敏感性低以及放射性治療產(chǎn)生的肺損傷，這是影響腫瘤靶區(qū)劑量乃至局部控制率的重要制約因素。CpG ODN(unmcthylatedcytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides，CpG ODN)是以CpG二核苷酸為核心的未甲基化的特殊的

2、DNA序列，它可以特異性激活TLR9(toll-likereceptor9，TLR9)受體，具有介導(dǎo)免疫的作用。CpG ODN的免疫作用存在種屬特異性，對(duì)動(dòng)物具有最佳刺激活性的是CpG ODN1826（包含序列GACGTT）?；A(chǔ)研究證實(shí)，CpG ODN1826對(duì)肺癌具有明顯放射增敏作用，很有潛力成為臨床上新型的肺癌放射增敏劑。然而CpG ODN1826在提高肺癌放射敏感性的同時(shí)是否也會(huì)提高肺癌周?chē)７谓M織對(duì)放射線的敏感性，從而引起或

3、加重放射性肺損傷？關(guān)于這方面的研究，國(guó)內(nèi)外尚少見(jiàn)。
　　本課題組建立了放射性肺損傷小鼠模型，以CpGODNI826干預(yù)放射性肺損傷小鼠，觀察CpG ODN1826對(duì)小鼠放射性肺損傷的作用，并初步探討CpG ODN1826在小鼠放射性肺損傷過(guò)程中的作用機(jī)理。以O(shè)DN作為陰性對(duì)照，ICR小鼠完全隨機(jī)分為空白對(duì)照組、RT(Radiation)組、CpG組、RT+CpG(Radiation combined withCpG ODN1826

4、)組、ODN組及RT+ODN(Radiation combined with ODN)組6組，每組小鼠40只。RT組、RT+CpG組和RT+ODN組左肺單次照射6MV X射線20Gy，在照后0、1、3、5和7d，空白對(duì)照組和RT組每次腹腔注射生理鹽水0.2ml，CpG組和RT+CpG組每次腹腔注射CpG ODN1826溶液0.2ml，ODN組和RT+ODN組每次腹腔注射ODN溶液0.2ml。RT組、RT+CpG組及RT+ODN組小鼠10

5、％水合氯醛溶液按0.004ml/g體積質(zhì)量腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉后以自行設(shè)計(jì)的固定及屏蔽裝置行直線加速器照射。6MV X射線單次照射小鼠左肺20Gy，照射量率2.0Gy/min，源皮距100cm，照射前照射靶區(qū)模擬機(jī)下精確定位，照射野大小為2cm×2cm，包括整個(gè)左肺。每組小鼠于照射后第1、5、15、30和90d處死取材。記錄小鼠死亡數(shù)目及死亡時(shí)間，解剖探查小鼠死亡原因。記錄小鼠濕肺重量及體重，計(jì)算肺系數(shù)，同時(shí)每組小鼠行外觀評(píng)分。制作小鼠

6、照射肺石蠟切片，行HE染色及Masson染色，光鏡下觀察小鼠放射性肺炎及放射性肺纖維化情況，進(jìn)行小鼠放射性肺炎評(píng)分及放射性肺纖維評(píng)分。ELISA法檢測(cè)每組小鼠血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的濃度。堿化水解法檢測(cè)小鼠左肺組織中羥脯氨酸(Hyp)含量。Real time PCR方法檢測(cè)小鼠左肺組織中MnSOD基因及FoxP3基因的相對(duì)mRNA

7、濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組、CpG組及ODN組小鼠無(wú)死亡，RT組小鼠死亡5只，RT+ODN組小鼠死亡5只，RT+CpG組小鼠死亡4只，解剖發(fā)現(xiàn)小鼠死因均為嚴(yán)重的肺炎。K-M生存曲線分析顯示，各照射組小鼠生存率之間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。照射5d后，小鼠體重下降明顯，15d后體重有所恢復(fù)但仍低于未照射組。照射30d后，RT+CpG組小鼠體重恢復(fù)明顯。未照射組小鼠外觀評(píng)分均高于照射組，RT+CpG組小鼠外觀評(píng)分高于另外RT組及RT+ODN組。這說(shuō)明

8、CpG ODN1826有利于恢復(fù)小鼠體重及改善生小鼠生活狀態(tài)。光鏡下觀察小鼠左肺病理切片發(fā)現(xiàn)，RT+CpG組小鼠左肺肺炎及肺纖維化程度不及RT組及RT+ODN組明顯。RT+CpG組肺炎評(píng)分及肺纖維評(píng)分均低于RT組及RT+ODN組。RT組及RT+ODN組小鼠血清MDA、TGF-β1、TNF-α濃度高于RT+CpG組。RT組及RT+ODN組小鼠血清SOD、GSH濃度低于RT+CDG組。RT組及RT+ODN組小鼠照射肺Hyp含量高于RT+Cp

9、G組小鼠。RT+CpG組小鼠MnSOD基因表達(dá)量高于RT和RT+ODN組。CpG組MnSOD基因表達(dá)量高于對(duì)照組和ODN組。相反的，RT+CpG組FoxP3基因表達(dá)量低于RT和RT+ODN組。CpG組FoxP3基因表達(dá)量低于對(duì)照組和ODN組。這些結(jié)果表明，CpGODN1826上調(diào)了抗氧化基因MnSOD的表達(dá)，生成抗氧化蛋白-MnSOD增多，增加了清除活性氧(reactive oxygen species，ROS)能力，從而減小了ROS所