間隙連接蛋白43表達(dá)下調(diào)對血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥反應(yīng)的作用.pdf

1、學(xué)校代碼：10385分類號：研究生學(xué)號：1200216023密級：間隙連接蛋白間隙連接蛋白4343表達(dá)下調(diào)對血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥反應(yīng)的作用表達(dá)下調(diào)對血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥反應(yīng)的作用Theeffectsofconnexin43downregulationonvularendothelialcellsinflammatyresponse作者姓名：張才臻張才臻指導(dǎo)教師：刁勇刁勇教授教授合作教師：學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向

2、：基因治療基因治療所在學(xué)院：生物醫(yī)學(xué)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)學(xué)院論文提交日期：二零一五年二零一五年六月十日十日摘要I摘要近年來研究發(fā)現(xiàn)，間隙連接蛋白43（connexin43，Cx43）的表達(dá)與皮膚傷口愈合關(guān)系密切。皮膚創(chuàng)傷后，傷口內(nèi)部及其周圍組織中Cx43的表達(dá)瞬時下調(diào)，可以加快皮膚傷口愈合的速率，提高傷口愈合的質(zhì)量。參與皮膚傷口修復(fù)的細(xì)胞主要有三種：成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。有關(guān)Cx43與傷口愈合分子機制的研究表明：Cx43表達(dá)下

3、調(diào)可以加快成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移速率，提高成纖維細(xì)胞和角化形成細(xì)胞增殖能力及角化細(xì)胞的分化能力。但Cx43是否影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能尚不清楚。已知血管內(nèi)皮細(xì)胞會參與皮膚傷口愈合的整個過程。在炎癥階段，白細(xì)胞需要滲漏穿過毛細(xì)血管內(nèi)皮層，到達(dá)創(chuàng)傷部位引發(fā)炎癥反應(yīng)。而在增殖階段，血管內(nèi)皮細(xì)胞是傷口處血管新生的主要細(xì)胞，新生血管可以為傷口區(qū)域細(xì)胞的遷移、增殖提供氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)?；谘軆?nèi)皮細(xì)胞對傷口愈合的重要性，本文研究分析Cx43下調(diào)

4、對于血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）是最常用的血管內(nèi)皮細(xì)胞模型，而且它對包括炎癥因子在內(nèi)的多種體內(nèi)因子均具有良好的反應(yīng)性。因此，本文選擇HUVECs作為體外研究模型。小干擾RNA（siRNA）能夠特異性減少蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。根據(jù)Cx43基因序列，本課題組設(shè)計了三種siRNA序列（Cx43siRNA1，Cx43siRNA2，Cx43siRNA3）。通過Westernblot實驗篩選沉默效果最佳的siRNA序列

5、及siRNA最佳作用時間，結(jié)果表明siRNA作用HUVECs24h后，Cx43沉默效率達(dá)到最大，并有效維持最佳沉默效果達(dá)72h以上。三種序列中，Cx43siRNA1沉默效果最佳，作用24h時，即可使HUVECs內(nèi)Cx43的表達(dá)降低約80%。因此，本課題選擇Cx43siRNA1作為特異性減少Cx43的siRNA序列，作用24h作為最佳作用時間，研究Cx43的表達(dá)下調(diào)對HUVECs細(xì)胞間通訊、增殖、遷移、以及血管生成活性的影響。實驗結(jié)果表明