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1、學(xué)校代碼:10385分類號:研究生學(xué)號:1200216023密級:間隙連接蛋白間隙連接蛋白4343表達(dá)下調(diào)對血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥反應(yīng)的作用表達(dá)下調(diào)對血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥反應(yīng)的作用Theeffectsofconnexin43downregulationonvularendothelialcellsinflammatyresponse作者姓名:張才臻張才臻指導(dǎo)教師:刁勇刁勇教授教授合作教師:學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向
2、:基因治療基因治療所在學(xué)院:生物醫(yī)學(xué)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)學(xué)院論文提交日期:二零一五年二零一五年六月十日十日摘要I摘要近年來研究發(fā)現(xiàn),間隙連接蛋白43(connexin43,Cx43)的表達(dá)與皮膚傷口愈合關(guān)系密切。皮膚創(chuàng)傷后,傷口內(nèi)部及其周圍組織中Cx43的表達(dá)瞬時下調(diào),可以加快皮膚傷口愈合的速率,提高傷口愈合的質(zhì)量。參與皮膚傷口修復(fù)的細(xì)胞主要有三種:成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。有關(guān)Cx43與傷口愈合分子機制的研究表明:Cx43表達(dá)下
3、調(diào)可以加快成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移速率,提高成纖維細(xì)胞和角化形成細(xì)胞增殖能力及角化細(xì)胞的分化能力。但Cx43是否影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能尚不清楚。已知血管內(nèi)皮細(xì)胞會參與皮膚傷口愈合的整個過程。在炎癥階段,白細(xì)胞需要滲漏穿過毛細(xì)血管內(nèi)皮層,到達(dá)創(chuàng)傷部位引發(fā)炎癥反應(yīng)。而在增殖階段,血管內(nèi)皮細(xì)胞是傷口處血管新生的主要細(xì)胞,新生血管可以為傷口區(qū)域細(xì)胞的遷移、增殖提供氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)?;谘軆?nèi)皮細(xì)胞對傷口愈合的重要性,本文研究分析Cx43下調(diào)
4、對于血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)是最常用的血管內(nèi)皮細(xì)胞模型,而且它對包括炎癥因子在內(nèi)的多種體內(nèi)因子均具有良好的反應(yīng)性。因此,本文選擇HUVECs作為體外研究模型。小干擾RNA(siRNA)能夠特異性減少蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。根據(jù)Cx43基因序列,本課題組設(shè)計了三種siRNA序列(Cx43siRNA1,Cx43siRNA2,Cx43siRNA3)。通過Westernblot實驗篩選沉默效果最佳的siRNA序列
5、及siRNA最佳作用時間,結(jié)果表明siRNA作用HUVECs24h后,Cx43沉默效率達(dá)到最大,并有效維持最佳沉默效果達(dá)72h以上。三種序列中,Cx43siRNA1沉默效果最佳,作用24h時,即可使HUVECs內(nèi)Cx43的表達(dá)降低約80%。因此,本課題選擇Cx43siRNA1作為特異性減少Cx43的siRNA序列,作用24h作為最佳作用時間,研究Cx43的表達(dá)下調(diào)對HUVECs細(xì)胞間通訊、增殖、遷移、以及血管生成活性的影響。實驗結(jié)果表明
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