兔雙側(cè)頸總動脈中度狹窄對急性全腦缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察兔雙側(cè)頸總動脈中度狹窄對急性全腦缺血再灌注損傷的影響及VEGF、Beclin1、RAM-11蛋白的表達(dá)變化。
　　 方法:80只雄性新西蘭白兔隨機(jī)分為正常組(A，n=5)、偽狹窄組(B，n=5)、狹窄組(C，n=5)狹窄+偽缺血組(D，n=5)、缺血組(E，n=30)、狹窄+缺血組(F，n=30)，E、F組在全腦缺血15分鐘后依不同的再灌注時間等分為6個小組，即再灌注1小時、3小時、6小時、12小時、24小時及96小時

2、組。以“針控線栓法”建立雙側(cè)頸總動脈中度狹窄，B組偽狹窄術(shù)后以及C、D、F組狹窄術(shù)后恢復(fù)正常喂養(yǎng)15天，E、F組以“夾閉雙側(cè)頸總動脈與椎動脈+穩(wěn)定血壓法”建立急性全腦缺血再灌注動物模型。各組于相應(yīng)時間點取右側(cè)額頂葉皮質(zhì)，觀察腦組織結(jié)構(gòu)及神經(jīng)元內(nèi)尼氏體含量的變化，免疫組化法半定量Beclin1、VEGF、RAM-11蛋白變化，透射電鏡觀察自噬溶酶體的形成，TUNEL染色檢測神經(jīng)元凋亡數(shù)量的動態(tài)變化。
　　 結(jié)果:1.B、C、D組鏡

3、下結(jié)構(gòu)與A組相近，E、F組可見程度不等的缺血損傷；A、B、C、D組尼氏體含量差別無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；E、F組尼氏體含量不同程度減少，對應(yīng)時間點F組尼氏體含量較E組多(P<0.05)。2.免疫組化示：(1)A、B、C、D組Beclin1蛋白表達(dá)水平低，組間無明顯差別(P>0.05)，E、F組1小時起B(yǎng)eclin1蛋白表達(dá)增加(P<0.05)，于再灌注6小時達(dá)高峰，再灌注96小時仍維持在較高水平(P<0.05)，對應(yīng)時間點F組

4、Beclin1蛋白表達(dá)較E組高(P<0.05)；(2)A、B組VEGF蛋白表達(dá)水平低，C、D組VEGF蛋白表達(dá)較A、B組高(P<0.05)，E、F組VEGF蛋白表達(dá)較C、D組高(P<0.05)，E、F組VEGF蛋白表達(dá)于再灌注24小時達(dá)高峰，再灌注96小時VEGF蛋白表達(dá)仍維持在較高水平(P<0.05)，對應(yīng)時間點F組VEGF蛋白表達(dá)較E組高(P<0.05)；(3)A、B、C、D組RAM-11蛋白表達(dá)水平低，組間差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P

5、>0.05)，E、F組RAM-11蛋白表達(dá)較A、B、C、D組高(P<0.05)，E、F組RAM-11蛋白表達(dá)于再灌注12小時達(dá)高峰，再灌注96小時仍維持在較高水平(P<0.05)，對應(yīng)時間點E組RAM-11蛋白表達(dá)較F組高(P<0.05)。3.透射電鏡在A、B、C、D組神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)未見到自噬體、溶酶體數(shù)量較少，E、F組于再灌注1小時組見到溶酶體數(shù)量增多和自噬體形成，再灌注3小時最明顯，一直持續(xù)到再灌注96小時。4.A、B、C、D組偶見凋亡