大鼠心肌梗死后神經(jīng)性一氧化氮合酶（nNOS）表達的動態(tài)變化及意義的研究.pdf

1、心肌梗死是心血管疾病的主要死亡原因，心肌梗死引起的死亡占全部心臟病死亡的50％，占全部心力衰竭死亡的40％[1]。因為心肌梗死的臨床常見性及危險性，其發(fā)病機理及防治的研究越來越受到重視。而心肌梗死后一系列體液因子變化的研究更是成為熱點。NO作為一種重要的生物分子，具有免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)傳遞、血壓生理調(diào)控和血小板凝聚的抑制等多種生理功能[2]。NO是由左旋精胺酸(L-Arg)和分子氧作為底物在其限速酶NOS的作用下生成的。NOS分為三類，即誘

2、生性NOS(iNOS)、內(nèi)皮細胞性NOS(eNOS)和神經(jīng)原性NOS(nNOS)。eNOS和nNOS活性依賴于鈣離子和鈣調(diào)蛋白，統(tǒng)稱為原生性NOS(cNOS)。無論哪種類型的NOS活性增加均可使NO合成增加。關(guān)于iNOS及eNOS在心血管系統(tǒng)中的表達及意義有很多研究，而nNOS過去經(jīng)常用于神經(jīng)系統(tǒng)的研究，但是近來有研究表明nNOS在心血管系統(tǒng)中的表達可能具有十分重要的意義，表現(xiàn)為增加的nNOS通過一定的機制作用于心臟交感及副交感神經(jīng)，降

3、低相應(yīng)時間點心肌梗死后大鼠的心率[3]。另有研究顯示，大鼠心肌梗死后nNOS表達的增加還可通過一定機制引起PGE2表達的增加，對梗死后心臟可能有一定的保護作用[4]。上述研究報道不多，很多機制仍不明了，但近年來nNOS在心血管方面的作用仍越來越受到重視。因而，本課題將以心肌梗死大鼠為模型，觀察大鼠心梗后nNOS表達的動態(tài)變化，評價其變化對大鼠心率及血漿中PGE2變化的影響及意義。 方法：結(jié)扎SD大鼠冠狀動脈前降支建立心肌梗死模型

4、。(1)實驗第一部分：30只心梗大鼠隨機分為24小時、3天、7天、l4天、28天等五個組(每組6只)，設(shè)6只3天假手術(shù)大鼠為對照組(Sham組)。HE染色下觀察大鼠心肌梗死后不同時期組織形態(tài)學(xué)改變；ECG記錄不同時間點大鼠心率的變化；免疫組化法檢測nNOS蛋白的表達變化；RT-PCR法對nNOSmRNA的表達變化做半定量分析；ELISA法檢測血漿中PGE2的表達變化。(2)實驗第二部分：36只梗死大鼠隨機分為2大組：干預(yù)組，非干預(yù)組。每

5、組又隨機分為24小時、3天、7天三個組(每組6只)。各時間點均設(shè)假手術(shù)組對照(Sham組)。干預(yù)組應(yīng)用選擇性nNOS抑滯劑7-a肖基吲唑(7-IN),溶于花生油，腹腔注射(40mg／kg)，每日一次，24小時組僅注射一次；3天組連續(xù)注射3天；7天組連續(xù)注射7天。免疫組化法檢測nNOS蛋白的表達變化；ECG記錄不同時間點大鼠心率的變化；RT-PCR法對nNOSmRNA的表達變化做半定量分析；ELISA法檢測血漿中PGE2的表達變化。

6、 結(jié)果：(1)Sham組大鼠心肌中nNOS表達很低，幾乎為零；(2)大鼠急性心肌梗死后l天，3天，7天，在梗死區(qū)域及非梗死區(qū)域，心肌細胞胞漿中均有大量棕黃色染色出現(xiàn)，nNOS蛋白質(zhì)表達呈(+)；l4天，28天心肌組織胞漿內(nèi)無棕黃色區(qū)域出現(xiàn)，nNOS表達呈(-)；(3)大鼠心肌梗死后nNOS蛋白質(zhì)表達從1天開始增加，3天達到高峰，7天依然在較高水平，14天開始逐漸下降,28天恢復(fù)至Sham水平；(4)RT-PCR半定量分析顯示：心肌梗死

7、后1天，非梗死區(qū)心肌組織中nNOSmRNA表達開始增加，3天達高峰，7天仍維持高水平，14天表達仍略高于正常水平，4周后表達恢復(fù)正常水平。其1天、3天、7天之值于Sham比較，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意義顯著；f5)ECG~,g錄顯示心梗后1天、3天、7天，大鼠心率明顯加快，P<0．01，14天大鼠心率仍略高于正常水平,28天大鼠心率與Sham組相近；(6)大鼠心肌梗死后血漿PGE2含量于1天后開始升高，至3天時達峰值“58．62+153．

8、55腭／mi,隨后又逐漸下降，至28天時大致降至正常水平，其1天、3天、7天之值于Sham比較，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意義顯著；(7)使用選擇性nNOS抑制劑7．硝基吲唑后，免疫組織化學(xué)染色顯示，大鼠急性心肌梗死后1天、3天、7天，在干預(yù)組，無論是梗死區(qū)域還是非梗死區(qū)域，心肌組織中均無棕黃色染色出現(xiàn)，提示nNOS表達呈(一)；(8)使用選擇性nNOS抑制劑7．硝基吲唑后，干預(yù)組大鼠心肌梗死后1天，3天，7天，nNOS蛋白質(zhì)表達水平僅略高于

9、Sham組，P>0．05,無統(tǒng)計學(xué)意義；干預(yù)組與非干預(yù)組比較，干預(yù)組心肌梗死后大鼠心肌組織中nNOS蛋白質(zhì)表達明顯低于非干預(yù)組，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意義顯著；(8)使用選擇性nNOS抑制劑7一硝基吲唑后，干預(yù)組大鼠心肌梗死后1天，3天，7天，非梗死區(qū)心肌組織中nNOSmRNA表達僅略高于Sham組，P>0．05，無統(tǒng)計學(xué)意義；干預(yù)組與非干預(yù)組比較，干預(yù)組心肌梗死后大鼠心肌組織中nNOSmRNA表達明顯低于非干預(yù)組，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意

10、義顯著；(8)ECG記錄使用選擇性nNOS抑制劑7一硝基吲唑后，干預(yù)組大鼠心率明顯快于Sham組，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意義顯著；干預(yù)組與非干預(yù)組比較，干預(yù)組心肌梗死后大鼠心率亦明顯快于非干預(yù)組心肌梗死后大鼠心率，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意義顯著；(9)使用選擇性nNOS抑制劑7．硝基吲唑后，干預(yù)組大鼠心肌梗死后1天，3天，7天，血漿PGE2水平與Sham組相近，P>0．05,無統(tǒng)計學(xué)意義；干預(yù)組大鼠血漿PGE2表達水平與非干預(yù)組大鼠血漿PG

11、E2表達水平比較，干預(yù)組大鼠血漿PGE2水平明顯低于非干預(yù)組，P<0．01，統(tǒng)計學(xué)意義顯著。 結(jié)論：(1)在大鼠急性心肌梗死后1天、3天、7天，無論是梗死區(qū)域還是非梗死區(qū)域，其nNOS蛋白質(zhì)表達均明顯高于Sham組；而非梗死區(qū)域mRNA的表達亦明顯高于Sham組；在大鼠急性心肌梗死后14天及28天nNOS蛋白質(zhì)表達與Sham組無明顯差異；nNOSmRNA表達于14天略高于正常水平,28天恢復(fù)至正常水平。即大鼠急性心肌梗死后存在n