多種?；o酶A脫氫酶缺乏癥兩家系臨床、病理及分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、研究背景：
　　 多種?；o酶A脫氫酶缺乏癥(multipleacyl-CoAdehydrogenasedeficiency,MADD，OMIM＃231680)，又稱戊二酸尿癥Ⅱ型（glutaricaciduriatypeⅡ，GA(Ⅱ)），屬常染色體隱性遺傳，該病以脂肪酸、氨基酸及膽堿的代謝紊亂為特征，主要是由于編碼線粒體中電子傳遞黃素蛋白（electrontransferflavoprotein，ETF）的ETFA(OMIM＃

2、608053)、ETFB(OMIM＃130410)基因或編碼電子傳遞黃素蛋白(:)泛醌氧化還原酶(ETF(:)ubiquinoneoxidoreductase，ETF(∶)QO)的電子傳遞黃素蛋白脫氫酶(electrontransferflavoproteindehydrogenase，ETFDH，OMIM＃231675)基因發(fā)生突變所致。其臨床表現(xiàn)高度異質(zhì)，多數(shù)以近端肌無力起病，并伴有消化道癥狀及代謝酸中毒。部分MADD患者核黃素治療

3、有顯著療效，稱為核黃素反應(yīng)性MADD(riboflavin-responsiveMADD，RR-MADD)。最近研究發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的RR-MADD患者的責(zé)任突變均出現(xiàn)在ETFDH基因。在此，我們對兩晚發(fā)型RR-MADD家系的臨床、病理及分子生物特征進(jìn)行研究。
　　 目的：
　　 探討多種?；o酶A脫氫酶缺乏癥兩家系的臨床、病理、分子遺傳學(xué)及治療預(yù)后的特征，并對其臨床表現(xiàn)型及基因型關(guān)系進(jìn)行分析。
　　 對象與方法：

4、
　　 該項(xiàng)研究中涉及的3位MADD患者分別來自兩個獨(dú)立家系，均為山東大學(xué)附屬千佛山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科臨床病例。通過臨床表現(xiàn)及病理初步診斷，并對其中患者1和3（不同家系）進(jìn)行了血?；鈮A及尿有機(jī)酸分析。后提取患者肌肉組織基因組DNA，PCR擴(kuò)增后，分別對ETFA、ETFB和ETFDH基因進(jìn)行突變檢測，得知測序結(jié)果后，隨訪采集兩個家系的血液標(biāo)本，對家系1中3代7人、家系2中3代5人進(jìn)行相應(yīng)基因突變檢測，同時(shí)檢測75位健康對照者的相關(guān)基因

5、，以探討基因突變型和臨床表現(xiàn)型間的關(guān)系。另采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法分別分析患者及正常對照者的肌肉細(xì)胞及外周血淋巴細(xì)胞中的ETF(∶)QO蛋白含量，分析其治療前后目的蛋白變化，對核黃素作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　 結(jié)果：
　　 1.該研究中兩家系3位患者，發(fā)病年齡分別為45歲（患者1）、19歲（患者2）和17歲（患者3）。均以雙下肢無力起病，后肌無力逐漸加重且累及范圍逐漸加大，以肢帶肌、脊旁肌、頸肌、頭面肌及四肢近端肌為主，

6、均伴有明顯肌萎縮，伴或不伴有肌肉疼痛。三位患者均不喜食肉。肌酶譜明顯增高，其中三者均有LDH增高，另外分別伴有CK、AST或HBDH增高。肌電圖示肌源性損害或正常。對單一核黃素治療有顯著療效。
　　 2.肌活檢病理結(jié)果顯示，H.E.染色肌纖維大小不等，異常纖維呈空泡和或篩狀改變，O.R.O染色見大小不等、密集程度不一的紅染脂滴，NADH染色可見深藍(lán)色顆粒不均勻沉積，上述改變均以Ⅰ型肌纖維為主。
　　 3.患者1和3尿有機(jī)

7、酸及血?；鈮A分析結(jié)果分別提示符合戊二酸尿癥Ⅱ型和多種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥的診斷。
　　 4.3位患者均存在ETFDH基因的復(fù)合雜合突變。本研究發(fā)現(xiàn)4個新突變:患者1分別為一雜合錯義突變c.1522C＞A(p.P508T)及一雜合移碼突變c.1583_1584insA(p.N528KfsX3);患者2、3為一雜合錯義突變c.242T＞C(p.L81P)及一剪切突變c.IVS5+7A＞G。上述突變在75位對照者的150個等位基因

8、中未被發(fā)現(xiàn)。ETFA及ETFB基因未發(fā)現(xiàn)突變。
　　 5.ELISA檢測結(jié)果示:發(fā)病期間，患者肌肉細(xì)胞中ETF(∶)QO含量比正常對照低50％左右(p＜0.01);而治愈后患者外周血淋巴細(xì)胞中ETF(∶)QO含量略高于正常對照者(p＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 本研究兩家系患者臨床表現(xiàn)主要為肌無力，可累及肢帶肌、脊旁肌、頸肌、頭面肌及四肢近端肌;肌肉病理示脂滴沉積;血尿生化分析可初步診斷該病;基因測序檢出E