rno-miR-122與rno-miR-182在對(duì)ACI大鼠移植性肝癌經(jīng)動(dòng)脈栓塞的相關(guān)功能性研究.pdf

1、目的：探討經(jīng)動(dòng)脈栓塞對(duì)ACI大鼠移植性肝癌中microRNA(miRNA)相對(duì)表達(dá)水平和潛在功能的影響，尋找與肝癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的miRNAs，并進(jìn)行miRNAs相關(guān)功能研究，為尋找評(píng)估療效及生存預(yù)后的生物標(biāo)志物提供線(xiàn)索。
　　材料與方法：30只ACI大鼠隨機(jī)為A、B兩組，每組15只。30只ACI大鼠均被行肝癌移植。A組動(dòng)物在肝癌移植14d后予經(jīng)動(dòng)脈栓塞，B組未行經(jīng)動(dòng)脈栓塞。A組在TAE術(shù)前以及術(shù)后7d，測(cè)量腫瘤表面最大長(zhǎng)徑(a)和

2、垂直短徑(b)，計(jì)算體積。B組則在腫瘤移植14d后測(cè)量腫瘤表面最大長(zhǎng)徑(a)和垂直短徑(b)，計(jì)算體積。在TAE7d后采集A組的肝癌組織和癌旁組織。B組在肝癌移植14d后采集的肝癌組織和癌旁組織。采取的標(biāo)本用TRIzol法抽提總RNA后利用Illumina Solexa平臺(tái)行高通量深度測(cè)序，對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，表達(dá)差異顯著者作為候選miRNA。利用Taqman qRT-PCR方法驗(yàn)證其在各對(duì)組織樣本中的相對(duì)表達(dá)水平;利用生物信息學(xué)軟件預(yù)

3、測(cè)備選miRNA的靶基因。再利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入HEK293T細(xì)胞中以獲得目的基因的表達(dá)，并用雙熒光檢測(cè)。
　　結(jié)果：30只大鼠肝癌均移植成功。A組TAE前與B組的腫瘤體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(A組體積0.474±0.181 cm3，B組體積0.517±0.197cm3，P=0.211)，其中A組TAE前與TAE術(shù)后7d的腫瘤體積存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異（A組術(shù)前體積0.474±0.181 cm3，A組術(shù)后體積0.329±

4、0.140 cm3，P=0.001），腫瘤體積明顯縮小。rno-miR-122在組織樣本中相對(duì)表達(dá)水平的低通量qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示，rno-miR-122在未接受經(jīng)動(dòng)脈栓塞的癌組織中相對(duì)低表達(dá)(P=1.3e-10)，在接受經(jīng)動(dòng)脈栓塞并且縮小的癌組織中表達(dá)較術(shù)前上調(diào)(P=0.03)，與高通量的測(cè)序結(jié)果一致;利用大量的生物信息學(xué)模型計(jì)算，我們分析預(yù)測(cè)并得到rno-miR-182所作用的潛在靶基因cebpa及其與rno-miR-122間

5、的信號(hào)通路，并在大鼠肝癌和癌旁組織中的得到表達(dá)驗(yàn)證。通過(guò)對(duì)HEK293T細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染及雙熒光報(bào)告基因檢測(cè)，進(jìn)一步證實(shí)了Cebpa是miR-182的直接靶基因。
　　結(jié)論：經(jīng)動(dòng)脈栓塞能夠使大鼠肝癌腫瘤體積縮小，rno-miR-122在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著抑癌的作用，TAE后rno-miR-122表達(dá)上升。本研究結(jié)果表明，在肝癌中miR-182高表達(dá)進(jìn)而對(duì)Cebpa抑制，而Cebpa的抑制進(jìn)一步抑制miR-122的表達(dá)，激活整個(gè)通