檢測雞傳染性支氣管炎病毒抗體的HI試驗(yàn)與ELISA相關(guān)性比較.pdf

1、本試驗(yàn)用傳染性支氣管炎病毒(IBV)M4l毒株接種10～11日齡的SPF雞胚，在37℃培養(yǎng)36小時(shí)后冷凍，收獲的尿囊液先經(jīng)1，000xg離心30min，棄去沉淀，將含有IBV的上清39，000xg超速離心50min或者PEG8000濃縮后，加HEPES緩沖液使IBV尿囊液的最終體積為原體積的1/100，然后加入胰酶、I型卵磷脂酶C(PLC1)、神經(jīng)氨酸酶處理IBV，胰酶、I型卵磷脂酶C(PLC1)、神經(jīng)氨酸酶的終濃度分別為lunit/m

2、l、2.5units/ml、2.5units/ml，IBV懸液和酶充分混合后，置37℃水浴3個(gè)小時(shí)，期間不斷振蕩。制備好的IBV HI抗原用于IBV HA試驗(yàn)，置4℃保存。 制備的IBV HI抗原在HA試驗(yàn)中能夠凝集雞紅細(xì)胞，由胰酶處理IBV制備的抗原在IBV HI試驗(yàn)中不具有特異性，而由PLCl、神經(jīng)氨酸酶制各的抗原在IBV HI試驗(yàn)中表現(xiàn)出很強(qiáng)的特異性。制備的抗原與進(jìn)口抗原相比較，IBV HA試驗(yàn)達(dá)到很高的效價(jià)。 本

3、試驗(yàn)對影響IBV HI試驗(yàn)的各種因素做了比較研究，選擇l％的雞紅細(xì)胞，pH6.5 0.0lM HEPES緩沖液為稀釋液，抗原抗體在室溫作用30min，加紅細(xì)胞后4℃50min判定結(jié)果等條件，建立了監(jiān)測IBV HI抗體的HI試驗(yàn)。該試驗(yàn)具有很強(qiáng)的特異性和重復(fù)性。 用建立的IBV HI試驗(yàn)對25份非免疫雞血清檢測，再通過攻毒試驗(yàn)，確定了免疫臨界線為6log2。HI試驗(yàn)與檢測IBV M41抗體的ELISA試劑盒檢測結(jié)果比較，HI滴度大