大鼠的運(yùn)輸應(yīng)激及谷氨酰胺的抗應(yīng)激研究.pdf

1、本研究利用一個(gè)模擬運(yùn)輸振動的裝置，建立大鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型，并通過灌飼條件性必需氨基酸谷氨酰胺(Glutamine，Gln)觀察了其對大鼠血清及各相關(guān)組織中氨基酸譜、相關(guān)生化指標(biāo)和骨骼肌熱休克蛋白mRNA表達(dá)的影響。探討了谷氨酰胺對模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠保護(hù)的可能機(jī)制，深化了對Gln生物學(xué)功能的認(rèn)識，為動物運(yùn)輸應(yīng)激的防護(hù)提供了新思路。 1.反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定大鼠血清及組織中游離的氨基酸 以鄰苯二甲醛(OP

2、A)為衍生劑，柱前衍生，Waters Spherisorb ODS柱(4.6 mm×250mm，5μm)柱分離，梯度洗脫，熒光檢測，在40分鐘內(nèi)15種氨基酸全部得到分離。在5.20-333nmol/L濃度范圍內(nèi)，氨基酸的峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)在0.9993-1之間。不同氨基酸測定的日內(nèi)、日間精密度分別為2.01％-5.53％和3.65％-5.88％。最低檢測限為1.2nmol/L。測定大鼠血清及下丘腦、肝臟、肌肉、心臟

3、和腎臟等組織中的游離氨基酸，不同氨基酸在大鼠血清、下丘腦、肝臟、肌肉、心臟和腎臟等組織中的回收率分別為107.10％-122.28％、90.90％-110.95％、98.96％-119.95％、90.33％-111.30％、93.82％-126.51％、90.39％-144.15％之間。本方法處理迅速，操作簡單，有好的線性和回歸系數(shù)，可以作為定性或定量的依據(jù)。 2.谷氨酰胺對模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠血清和組織中氨基酸譜的影響 實(shí)

4、驗(yàn)采用70只雄性SD大鼠，設(shè)陰性對照組(-)10只，其他60只大鼠分別模擬低頻(4Hz)和高頻(6Hz)兩種汽車公路運(yùn)輸振動頻率，每種處理實(shí)驗(yàn)大鼠30只，并分別設(shè)有陽性對照組(+)，苯巴比妥組(P)和谷氨酰胺組(Q)，每組10只。(-)組和(+)組每天分別灌飼生理鹽水(lmL/只)，P組和Q組每天分別灌飼苯巴比妥(15mg·Kg-1/只)和谷氨酰胺(500mg·Kg-1/只)，連續(xù)10天，每天1次。10天后，除(-)組外，其他6組分別模

5、擬低頻(L)和高頻(H)運(yùn)輸應(yīng)激2小時(shí)。然后處死大鼠，取血清、下丘腦、肝臟和骨骼肌，采用RP-HPLC法分析模擬運(yùn)輸應(yīng)激后其中游離氨基酸含量的變化。結(jié)果：與陰性對照組相比，補(bǔ)充谷氨酰胺后，低頻或高頻應(yīng)激大鼠的血清、下丘腦和骨骼肌中與應(yīng)激密切相關(guān)的部分生糖氨基酸，芳香族氨基酸(AAA)和支鏈氨基酸(BCAA)含量都沒有顯著差異(P>0.05)，而與陽性對照組相比，上述指標(biāo)均差異顯著(P<0.05)或差異極顯著(P<0.01)。而鎮(zhèn)靜藥物苯

6、巴比妥對抗運(yùn)輸應(yīng)激則沒有效果。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，谷氨酰胺具有保護(hù)大鼠抵抗運(yùn)輸應(yīng)激的作用。 3.谷氨酰胺對模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠主要相關(guān)生化指標(biāo)及HSP72mRNA表達(dá)的影響 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)同第二部分，分析肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)、乳酸脫氫酶(LactateDehydrogenase，LDH)的活性以及血糖(blood glucose)、肌糖原(muscle glycogen)、肝糖原(liver glycogen)