蜈蚣水提取物對膽管癌細(xì)胞株QBC939體內(nèi)外抗腫瘤作用的實驗研究及機制探討.pdf

1、目的:
　　 1.用光學(xué)顯微鏡、MTT、細(xì)胞集落試驗及透射電鏡等不同方法,觀測不同濃度的蜈蚣水提取物對人膽管癌細(xì)胞株QBC939體外抑制作用。計算其IC50值。
　　 2.建立膽管癌細(xì)胞株QBC939裸鼠皮下瘤模型,用10g/kg蜈蚣水提取物灌胃處理膽管癌細(xì)胞株QBC939移植瘤裸鼠,比較治療組及對照組皮下瘤模生長情況。
　　 3.取治療組及對照組人膽管癌細(xì)胞株QBC939裸鼠皮下移植瘤瘤體行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,尋找

2、差異性蛋白。
　　 4.根據(jù)蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果,取膽管癌細(xì)胞株QBC939裸鼠皮下瘤體行BCL-2及BAX的半定量RT-PCR及Western blot分析,探討蜈蚣水提取物促進膽管癌細(xì)胞凋亡的可能機制。
　　 方法:
　　 1.光鏡觀測蜈蚣水提取物對人膽管癌細(xì)胞株QBC939作用后的形態(tài)學(xué)改變及集落變化,計算其IC50值。透射電鏡觀測IC50值蜈蚣水提取物處理人膽管癌細(xì)胞株細(xì)胞QBC93948小時,腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變

3、情況。
　　 2.建立人膽管癌細(xì)胞QBC939裸鼠皮下移植瘤模型,移植瘤術(shù)后第12天,采用10g/kg蜈蚣水提取物灌胃處理移植瘤裸鼠,每日一次,共21次。觀察記錄腫瘤變化情況繪制生長曲線圖。移植瘤術(shù)后第35天解剖移植瘤裸鼠,觀測皮下移植瘤體積、重量及H.E染色情況。
　　 3.用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)檢測蜈蚣水提取物處理前后兩組人膽管癌細(xì)胞QBC939皮下移植瘤蛋白表達的差異。
　　 4.上述兩組人膽管癌細(xì)胞QBC939

4、皮下移植瘤的標(biāo)本行RT-PCR及Western blot檢測Bcl-2及Bax的變化情況。探討蜈蚣水提取物促進膽管癌細(xì)胞凋亡的可能機制。
　　 結(jié)果:
　　 1.蜈蚣水提取物有抑制膽管癌QBC939細(xì)胞生長的作用,隨著蜈蚣水提取物濃度逐漸增加,其抑瘤作用遞增。其IC50值為12.5mg/ml.蜈蚣水提取物能抑制人膽管癌細(xì)胞株QBC939細(xì)胞集落的形成。電鏡觀察用半數(shù)抑制劑量的蜈蚣水提取物處理人QBC939膽管癌細(xì)胞48h

5、后,可見明顯的凋亡小體。
　　 2.成功建立人膽管癌細(xì)胞株QBC939裸鼠移植瘤動物模型;與對照組相比,10 g/kg蜈蚣水提取物灌胃對裸鼠QBC939膽管癌皮下移植瘤具有抑制作用;H.E染色可見實驗組腫瘤細(xì)胞可見空泡化及大量核固縮,而對照組少見。
　　 3.蛋白質(zhì)組學(xué)檢測顯示,對比QBC939皮下移植瘤細(xì)胞38個差異性蛋白。有27個下調(diào),有11個上調(diào), CK8、CK18及Bcl-2相關(guān)蛋白表達下調(diào),Galectin-1

6、和Galectin-7表達上調(diào)。
　　 4.RT-PCR及Western blot檢測實驗組的Bax上調(diào)而:Bcl-2下調(diào)。
　　 結(jié)論:
　　 1.蜈蚣水提取物有抑制膽管癌QBC939細(xì)胞生長的作用,隨著蜈蚣水提取物濃度逐漸增加,抑瘤作用遞增,其48小時IC50值為12.5mg/ml。
　　 2:成功建立人膽管癌細(xì)胞株QBC939裸鼠移植瘤動物模型,10g/kg蜈蚣水提取物對裸鼠QBC939膽管癌皮下移