腦缺血對阿爾茨海默病模型大鼠tau蛋白異常磷酸化及膽堿能系統(tǒng)影響的實驗研究.pdf

1、研究目的 1、探討杏仁體注射Aβ25-35對大鼠學習記憶功能、腦皮質(zhì)和海馬tau蛋白異常磷酸化(Pser404-tau)、 膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)和乙酰膽堿酯酶(AchE)的影響。 2、在阿爾茨海默病(AD)模型的基礎上進行2-VO手術，探討腦缺血對AD的影響。 3、觀察2-VO術后大鼠腦中Pser404-tau、ChAT和AchE的變化，探討腦缺血是否可以引起類AD 樣改變。 4、通

2、過葛根素(Pue)對腦缺血大鼠和AD大鼠的干預研究，探討Pue治療AD的機理。 研究方法 1、模型的制作：AD模型的制作：SD大鼠以0.4％戊巴比妥鈉麻醉，于腦立體定位儀下定位右 側(cè)杏仁體，用微量注射器緩慢勻速注入Aβ25-35(5.0nmol/3μl)；腦缺血(CI)模型的制作：SD大鼠麻 醉后，分離雙側(cè)頸總動脈，永久結扎左側(cè)，右側(cè)夾閉60min后放開；AD+CI模型的制作：立體定位 術后14天

3、，將AD大鼠行腦缺血處理，方法同CI組。 2、Pue治療組于立體定位術后14天/缺血手術后腹腔注射給藥，劑量為80mg/kg/d，共7天。 3、分別在實驗前、立體定位術后14天、21天進行Y-迷宮試驗，檢測大鼠學習記憶能力。 4、立體定位術后21天(即缺血術后7天)處死所有大鼠，應用免疫組化方法測定各組大鼠皮 質(zhì)和海馬Pser404-tau、ChAT陽性細胞數(shù)的表達；應用比色法檢測各組大鼠雙側(cè)海馬AchE

4、蛋白含量及 活性的變化。 研究結果 1、Aβ25-35、腦缺血對SD大鼠的影響：Aβ25-35單側(cè)杏仁體一次性注射可導致大鼠學習記憶功能 障礙；AD 模型大鼠皮質(zhì)、海馬的Pser404-tau陽性細胞數(shù)顯著增高(P＜0.01)，ChAT活性明顯降低 (P＜0.01)；AD模型大鼠右側(cè)海馬AchE蛋白含量、活性明顯降低(P＜0.05)，左側(cè)海馬AchE蛋白含量 及活性均無明顯變化(P＞0.0

5、5)。CI組大鼠皮質(zhì)、海馬Pser404-tau陽性細胞數(shù)增高而ChAT活性降低(P 值均小于0.05)，雙側(cè)海馬AchE蛋白含量和活性均降低(P＜0.05)，且右側(cè)海馬AchE的變化較左側(cè)更 為顯著。 2、腦缺血對AD的影響：相對于AD模型組，AD+CI組大鼠的記憶功能進一步下降，皮質(zhì)和海 馬Pser404-tau陽性細胞數(shù)上升，ChAT活性下降(P＜0.05)，右側(cè)海馬AchE蛋白含量降低，AchE活

6、性 也下降(P＜0.05)。 3、Pue可顯著改善AD、缺血大鼠的學習記憶功能(P＜0.05)；相對于AD/CI模型組，Pue治療組 Pser404-tau的陽性細胞數(shù)顯著降低，而ChAT表達明顯升高(P＜0.05)；右側(cè)海馬AchE含量及活性升高 (P＜0.05)。 研究結論 1、杏仁體注射Aβ25-35產(chǎn)生的神經(jīng)毒性作用可導致腦內(nèi)Ser404位點的tau蛋白異常磷酸化和膽