HLA-G在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及對預(yù)后影響.pdf

1、背景： 肝細(xì)胞肝癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，同時也是癌癥相關(guān)性死亡的重要原因，每年至少有100萬新發(fā)病例。外科切除是現(xiàn)階段的主要治療手段，但很多病人在明確診斷時已經(jīng)是中晚期而不能手術(shù)，根治性治療只適用于少數(shù)患者。長期的臨床實踐表明，對于肝癌的治療，單純手術(shù)的治療效果是有限的，同時由于腫瘤耐藥性的產(chǎn)生，目前常用于肝癌治療的一些化療藥物的效果也不佳。因此，提高肝癌患者總體生存率的關(guān)鍵在于對癌癥的早期診斷和早期治療以及建立術(shù)后腫瘤

2、復(fù)發(fā)的有效的監(jiān)測體系。現(xiàn)階段急切需要我們加強(qiáng)對肝癌發(fā)病機(jī)理和分子生物學(xué)特性等的基礎(chǔ)研究，這樣可以進(jìn)一步推動新型的分子水平的靶向治療藥物的發(fā)展和新的治療方案的產(chǎn)生。 HLA-G是一種非經(jīng)典人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類分子，限制地分布在免疫赦免部位，使其不同于經(jīng)典人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類分子。它能選擇性表達(dá)在母兒界面的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞上，對蛻膜NK細(xì)胞的溶解活性起抑制作用，從而使胎兒免受母體的免疫排斥。如今，人們已經(jīng)關(guān)注HLA-G在腫瘤免疫上所起的作

3、用，因為在體外該分子能發(fā)揮對NK細(xì)胞的抑制。1998年，Paul P等人首先指出在黑素瘤細(xì)胞中有HLA-G的異常表達(dá)，這也導(dǎo)致了腫瘤逃避免疫監(jiān)視。自那以后，許多研究小組報道在多種惡性腫瘤中有腫瘤特異性HLA-G地表達(dá)，包括腎細(xì)胞癌，乳腺癌，惡性間皮瘤，膀胱癌，胃腸道腫瘤及宮頸癌等。然而，在腫瘤病灶周圍的正常組織或是良性病變中卻未發(fā)現(xiàn)HLA-G的表達(dá)。這些研究提示，HLA-G的表達(dá)與惡性疾病有關(guān)，這或許可以作為一種生物學(xué)標(biāo)志物用于癌癥的診

4、斷及預(yù)測臨床治療效果。 目的： 研究顯示，惡性病變中表達(dá)HLA-G是腫瘤逃避免疫破壞的一種策略。這類非經(jīng)典人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類分子能通過同抑制性受體結(jié)合從而對T細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的功能進(jìn)行抑制。由于HLA-G具有免疫抑制的作用，因此在病理狀態(tài)下要對HLA-G的表達(dá)情況進(jìn)行監(jiān)視。目前，有關(guān)于HLA-G在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)情況以及對預(yù)后影響等方面的資料還很缺乏，實驗的目的就是探討HLA-G在肝癌患者病變組織及血清

5、中的表達(dá)情況，試探性研究HLA-G分子在預(yù)測肝癌患者預(yù)后等方面的價值。 方法： 選取2004年5月至2006年8月在本中心接受肝癌手術(shù)治療的病例36例，均獲得隨訪并納入本研究中。36例患者中男性30例，女性6例，平均年齡為49.1歲(30-67歲)，按WHO組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)分級，其中高分化5例，中分化23例，低分化8例，按TNM分期標(biāo)準(zhǔn)各期病例數(shù)分別為Ⅰ/Ⅱ期12例，Ⅲ/Ⅳ24例，術(shù)前血清甲胎蛋白(AFP)高于400ng/

6、L的有19例(占52.8％)。(詳見表2)36例患者術(shù)后均經(jīng)病理證實為肝細(xì)胞肝癌(HCC)，其中31(86.1％)例病理組織學(xué)檢查證實其合并有肝硬化?；颊咝g(shù)后的平均生存時間為19.6個月，中位生存時間為18.5月(1.6-46.4月)。全部肝癌患者術(shù)后進(jìn)入隨訪程序，常規(guī)進(jìn)行甲胎蛋白(AFP)監(jiān)測、B超、胸片及全身骨骼ECT等檢查。 收集患者術(shù)前非抗凝血，通過離心吸取上層血清，血清標(biāo)本及術(shù)中切除的腫瘤組織都置于-80℃低溫冰箱保存

7、。另外，選取25例因肝炎肝硬化在本中心接受手術(shù)治療的病例，收集術(shù)前血清標(biāo)本和術(shù)中切除的病變組織；同時，25例健康人血清標(biāo)本從體檢中心獲取作為對照。應(yīng)用sHLA-G ELISA kit監(jiān)測36例肝癌患者，25例肝硬化患者及25例健康人血清中sHLA-G的濃度。蛋白免疫印跡法(Westem Blotting)檢測癌組織及肝硬化組織中HLA-G蛋白表達(dá)的情況。 所有統(tǒng)計分析均采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行。肝癌組同良性病變肝硬化組

8、及健康人組的血清sHLA-G水平比較采用方差檢驗。肝癌組織中HLA-G表達(dá)情況同臨床病理資料的關(guān)系及對總體生存率的影響采用卡方檢驗?；颊咝g(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、生存率差異統(tǒng)計采用Kaplan-Meiet方法，組間差異采用Log-rank檢驗法比較。采用Cox比例風(fēng)險模型進(jìn)行多變量分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： ELISA結(jié)果顯示肝癌組、肝硬化組及健康人組的血清中sHLA-G的水平分別為132.6±31.4U/ml，

9、63.5±22.1U/ml，47.0±15.5U/ml，通過方差分析進(jìn)行組間比較發(fā)現(xiàn)肝癌組同另外兩組之間存在顯著差異(P值均＜0.01)；而肝硬化組同健康人組相比差異不顯著。 蛋白免疫印跡法(Western Blotting)結(jié)果表明在36例肝癌組織中有24例HLA-G有表達(dá)，陽性率為66.7％(24/36)，而肝硬化組織中沒有表達(dá)。同時結(jié)合患者的臨床病理資料進(jìn)行卡方檢驗，發(fā)現(xiàn)HLA-G的表達(dá)與年齡、性別、組織學(xué)分級、AFP水平

10、等無相關(guān)性(P值分別為1.000、0.149、0.830、0.158)，但同疾病的分期等因素有正性相關(guān)(P=0.048)。 隨訪結(jié)果顯示：36例肝癌患者中17例已死亡，其中16例死于復(fù)發(fā)，1例死于感染，現(xiàn)仍存19例。其中，存活的19例患者中HLA-G表達(dá)的有9例，無表達(dá)的為10例；死亡的17例患者中HLA-G表達(dá)的有15例，無表達(dá)的為2例。36例HCC患者術(shù)后平均生存時間為19.6個月，中位生存時間為18.5個月(1.6-46.

11、4個月)，HLA-G-的肝癌患者總體生存率明顯好于HLA-G+的肝癌患者(P：0.014)，且兩者1年生存率分別為83.3％和66.6％，1年無瘤生存率分別為75％和37.5％，兩者差異均顯著(P=0.027，P=0.035)。此外， Kaplan-Meier方法進(jìn)行單因素分析顯示年齡、性別、組織學(xué)分級、疾病分期對患者腫瘤復(fù)發(fā)、生存無影響(P＞0.05)，但AFP水平和HLA-G的表達(dá)對患者的復(fù)發(fā)、生存有顯著相關(guān)(P＜0.05)。上述因

12、素行Cox逐步回歸分析結(jié)果顯示，術(shù)前AFP水平和HLA-G的表達(dá)與患者腫瘤復(fù)發(fā)、生存之間也存在顯著相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.在實驗中，我們發(fā)現(xiàn)肝癌患者術(shù)前血清中sHLA-G水平明顯高于肝硬化組及健康人組，且差異顯著(P值均＜0.01)；HLA-G分子在肝癌病變組織中有表達(dá)，陽性率為66.7％，而在肝硬化組織中不表達(dá)。 2.從本實驗小樣本研究看，HLA-G-的肝癌患者預(yù)后明顯優(yōu)于HLA-G+的肝癌患者，H