2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩72頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450,P450)是龐大的家族酶系,在昆蟲內(nèi)源及外源化合物代謝中發(fā)揮著重要作用。飛蝗(Locusta migratoria)是重要的農(nóng)業(yè)害蟲,揭示其體內(nèi)P450代謝解毒功能對飛蝗有效治理尤為必要。本文以飛蝗2個P450基因CYP408B1和CYP409A1為靶標(biāo),將其分別轉(zhuǎn)入果蠅(Drosophila melanogaster)體內(nèi),成功建立了轉(zhuǎn)基因果蠅品系,測定了果蠅對殺蟲劑的敏感性以及P45

2、0總酶活性;針對CYP408B1和CYP409A1構(gòu)建了重組質(zhì)粒,利用大腸桿菌(Escherichia coli)原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行體外異源共表達(dá),為探索飛蝗 CYP408B1和 CYP409A1基因?qū)⑾x劑的代謝解毒功能提供依據(jù)。本文主要研究內(nèi)容有:
  一、飛蝗2個P450轉(zhuǎn)基因果蠅品系對殺蟲劑的敏感性研究
  采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功構(gòu)建了轉(zhuǎn)飛蝗P450基因CYP408B1和CYP409A1的純合果蠅品系,分別選擇雄性轉(zhuǎn)基因果

3、蠅 UAS-CYP408B1、UAS-CYP409A1和親本果蠅attp40與 tub-gal4的處女果蠅雜交,提取子一代啟動目的基因 CYP408B1和CYP409A1表達(dá)的轉(zhuǎn)基因果蠅品系tub>CYP408B1和tub>CYP409A1以及對照組果蠅品系tub>attp40的DNA和總RNA,將RNA體外反轉(zhuǎn)錄為cDNA。分別以DNA和cDNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從而驗證構(gòu)建好的轉(zhuǎn)基因果蠅品系UAS-CYP408B1和UAS-C

4、YP409A1。以DNA為模板的PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示,實驗組tub>CYP408B1和tub>CYP409A1中均可檢測到目的條帶,大小分別為1555 bp和1585 bp,表明已成功的將飛蝗CYP408B1和CYP409A1插入果蠅體內(nèi);以cDNA為模板的 RT-PCR和 RT-qPCR,實驗組中均有目的條帶且表達(dá)量較高,表明轉(zhuǎn)基因果蠅品系tub>CYP408B1和tub>CYP409A1中目的基因均可大量表達(dá)。
  通過殺蟲劑生

5、物學(xué)測定,進(jìn)一步分析了轉(zhuǎn)基因果蠅品系 tub>CYP408B1、tub>CYP409A1以及對照組tub>attp40、UAS-CYP408B1、UAS-CYP409A1和attp40對溴氰菊酯、馬拉硫磷和毒死蜱3種殺蟲劑的敏感性,實驗結(jié)果顯示:實驗組tub>CYP408B1和 tub>CYP409A1對溴氰菊酯的抗藥性均較對照組為高,且與tub>attp40相比,抗性比分別為1.59和1.83,而對馬拉硫磷和毒死蜱的抗性比并未提高。<

6、br>  采用熒光法定量測定轉(zhuǎn)基因果蠅品系tub>CYP408B1、tub>CYP409A1以及對照組tub>attp40中細(xì)胞色素P450的總酶活性,測定結(jié)果顯示:實驗組tub>CYP408B1和tub>CYP409A1的總酶活性與對照組tub>attp40相比,均無顯著性差異。
  二、飛蝗2個P450基因的原核表達(dá)
  采用ompA+2策略對飛蝗CYP408B1和CYP409A1的氮端進(jìn)行修飾,依次插入表達(dá)載體pCWo

7、ri的NdeI處;采用pelB策略修飾飛蝗CPR(NADPH細(xì)胞色素P450還原酶)的氮端,首先同上插入 pCWori,隨后再轉(zhuǎn)入帶有 p15A的表達(dá)載體pAC-Kan-alphaGal4中,從而完成重組質(zhì)粒(pCW/CYP408B1、pCW/CYP409A1和pAC/CPR)的構(gòu)建。通過PCR和測序鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒,PCR鑒定結(jié)果顯示:片段大小分別為1642 bp、1654 bp和2143 bp,大小與預(yù)期相近,且測序結(jié)果表明插入的

8、基因序列正確無誤。
  將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pCW/CYP408B1和pCW/CYP409A1分別與pAC/CPR在大腸桿菌BL21(DE3)細(xì)胞中進(jìn)行共表達(dá)或單獨表達(dá)。不同條件誘導(dǎo)的原核表達(dá)檢測結(jié)果顯示:CYP409A1和CPR均可表達(dá),蛋白分子量分別約為58 ku和77 ku,但均為包涵體,而CYP408B1未能成功表達(dá)。
  綜上所述,本文利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功構(gòu)建了轉(zhuǎn)飛蝗 P450基因 CYP408B1和CYP409A1的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論