化學(xué)發(fā)光免疫分析在游離甲狀腺素測(cè)定中的應(yīng)用研究.pdf

1、化學(xué)發(fā)光免疫分析方法靈敏、特異、簡(jiǎn)便，在生命、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。本論文主要圍繞游離甲狀腺素的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的建立和優(yōu)化開(kāi)展了一些研究。通過(guò)結(jié)合抗體-抗原的高特異免疫分析技術(shù)、高效的酶標(biāo)記技術(shù)和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)體系，建立了測(cè)定體液內(nèi)甲狀腺激素的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，對(duì)大批量臨床樣品篩選、檢測(cè)和體外診斷試劑的研發(fā)有一定臨床應(yīng)用價(jià)值和學(xué)術(shù)意義。
　　 首先，簡(jiǎn)要介紹了化學(xué)發(fā)光免疫分析的原理和甲狀腺激素的種類(lèi)、來(lái)源和作用功

2、能，并對(duì)游離甲狀腺激素的檢測(cè)技術(shù)和方法進(jìn)行了綜述。
　　 其次，建立了一種簡(jiǎn)單鑒定小分子的酶標(biāo)記物質(zhì)量方法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本方法可以在選用原料時(shí)保證酶標(biāo)記物質(zhì)量的合格，從而保證了后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
　　 再次，建立了一種基于磁性微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定人血清中的游離甲狀腺素的方法，該方法具有靈敏度高、高特異、快速、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好等特點(diǎn)。本方法使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的甲狀腺素類(lèi)似物與血清中的游離甲狀腺素共同競(jìng)

3、爭(zhēng)結(jié)合羊抗甲狀腺素抗體；表面包被有抗異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）的磁性微粒子用作免疫反應(yīng)的固相載體和分離劑，以辣根過(guò)氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）催化H2O2-luminol化學(xué)發(fā)光體系作為檢測(cè)體系；對(duì)免疫反應(yīng)的試驗(yàn)條件及各項(xiàng)物理化學(xué)參數(shù)如：反應(yīng)溫度、溫育時(shí)間、稀釋度、磁性微粒子和發(fā)光底物的用量等進(jìn)行了測(cè)定和優(yōu)化。在最佳條件下，該方法的線性范圍是0～122

4、pmolL-1，檢測(cè)限為0.25pmolL-1；批內(nèi)變異和批間變異均小于14.6％；通過(guò)本法對(duì)實(shí)際血清樣本檢測(cè)，并將結(jié)果與商品化試劑盒的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析，其相關(guān)系數(shù)r2=0.9592，證實(shí)本法可用于人血清中游離甲狀腺素的臨床測(cè)定。
　　 最后，使用通用二抗固相法制備固相抗甲狀腺素抗體，使用魯米諾-雙氧水-辣根過(guò)氧化物酶化學(xué)發(fā)光體系作為檢測(cè)體系，發(fā)展了一種通用二抗固相化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法并將其應(yīng)用于臨床游離甲狀腺素的測(cè)定。驢

5、抗羊IgG（即二抗）通過(guò)物理吸附包被在96孔聚苯乙烯微孔板上，對(duì)其進(jìn)行封閉后，作為一個(gè)通用的固相應(yīng)用于各種物質(zhì)的免疫分析。向該固相中加入甲狀腺素的多克隆羊源抗體，樣品抗原和酶標(biāo)記物后進(jìn)行溫育反應(yīng)，羊抗甲狀腺素抗體通過(guò)與二抗之間的免疫反應(yīng)被間接固定化在聚苯乙烯微孔板上，樣品抗原和酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合羊抗甲狀腺素抗體，形成免疫復(fù)合物，通過(guò)測(cè)定酶促化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度來(lái)達(dá)到定量檢測(cè)的目的。對(duì)一些相關(guān)參數(shù)和實(shí)驗(yàn)條件諸如免疫試劑的稀釋度、溫育時(shí)間、