羅非魚微衛(wèi)星DNA指紋圖譜的構(gòu)建及其在種質(zhì)鑒定中的應(yīng)用.pdf

1、本論文以羅非魚三個(gè)種共240個(gè)樣品為試材，利用微衛(wèi)星標(biāo)記篩選可作為三種羅非魚鑒定標(biāo)準(zhǔn)的特異位點(diǎn)，構(gòu)建了代表三種羅非魚品種種質(zhì)的DNA指紋圖譜，具體研究?jī)?nèi)容如下： 1、利用微衛(wèi)星技術(shù)進(jìn)行了三種羅非魚的分子鑒定研究，通過參考GenBank和已報(bào)道的序列，挑選103個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物，對(duì)奧利亞、尼羅和橙色莫桑比克羅魚進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得具有穩(wěn)定擴(kuò)增產(chǎn)物的位點(diǎn)77個(gè)，篩選其中17個(gè)微衛(wèi)星特異位點(diǎn)，用于三種羅非魚的種質(zhì)鑒定。 2、

2、三種羅非魚微衛(wèi)星DNA指紋圖譜的構(gòu)建。我們應(yīng)用擴(kuò)增穩(wěn)定、清晰的82個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，對(duì)奧利亞、尼羅和橙色莫桑比克三種羅非魚共240個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)增分析，一共檢測(cè)出605個(gè)等位基因，在相同遷移率位置上以1或0記錄擴(kuò)增片段的有或無，形成每個(gè)羅非魚個(gè)體對(duì)應(yīng)的指紋數(shù)碼。采用數(shù)據(jù)庫(kù)軟件管理這些數(shù)碼，形成三種羅非魚的等位基因數(shù)據(jù)庫(kù)，根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)中每個(gè)等位基因的大小，利用Excel作圖工具構(gòu)建了三種羅非魚的DNA指紋模式圖，用盡可能多的位點(diǎn)呈現(xiàn)出三種羅非魚整體

3、的遺傳概貌。從圖譜可明顯看出尼羅羅非魚的多態(tài)性水平最高，奧利亞和莫桑比克羅非魚的多態(tài)性水平都較低。利用在奧利亞、尼羅和莫桑比克羅非魚中具有獨(dú)有條帶的16對(duì)微衛(wèi)星核心引物組合，產(chǎn)生了數(shù)字化的DNA指紋代碼，用于三種羅非魚及其雜交種的鑒定。 3、為方便處理和應(yīng)用于實(shí)踐，根據(jù)等位基因數(shù)據(jù)庫(kù)為背景，運(yùn)用Visual basic6.0，開發(fā)了基于Windows XP操作平臺(tái)的鑒定軟件——珠江水產(chǎn)研究所魚類種質(zhì)鑒定軟件1.0(PRIFRIL

4、0)。 4、運(yùn)用38個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)奧利亞、尼羅和橙色莫桑比克三種羅非魚8個(gè)群體的遺傳多樣性和遺傳分化進(jìn)行了研究。對(duì)三種羅非魚而言，尼羅羅非魚的平均等位基因數(shù)(6.42)、平均觀測(cè)雜合度(0.5263)、平均多態(tài)信息含量(0.3500)最高，橙色莫桑比克羅非魚平均等位基因數(shù)(2.0789)、平均觀察雜合度(0.3052)、平均多態(tài)信息含量(0.2644)最低。聚類分析顯示，奧利亞與橙色莫桑比克羅非魚的親緣關(guān)系較近，這與前人結(jié)果一致

5、。尼羅羅非魚中高要、番禺和鷺業(yè)群體的遺傳分化顯著(Fst為0.1-0.8202)，相對(duì)而言?shī)W利亞羅非魚高要83系、高要02系、番禺和鷺業(yè)群體的遺傳分化不顯著(Fst為0-0.3918)，這些表明我國(guó)尼羅羅非魚的遺傳多樣性較高，表明尼羅羅非魚仍具有一定的選育潛力，奧利亞和橙色莫桑比克羅非魚的遺傳多樣性相對(duì)較低。國(guó)內(nèi)外目前對(duì)于這兩種羅非魚，則保持這些良種羅非魚的遺傳純度，選擇體質(zhì)較好的個(gè)體進(jìn)行雜交選育，產(chǎn)生雄性率高等具有明顯雜交優(yōu)勢(shì)的雜種魚