生姜蛋白酶的提取.pdf

1、采用溶劑沉淀法對多種狀態(tài)生姜中的生姜蛋白酶進(jìn)行提取。通過單因素試驗(yàn)研究了工藝條件對生姜蛋白酶提取率的影響，對不同物料狀況下提取的生姜蛋白酶進(jìn)行了研究：建立了提取物中生姜蛋白酶含量的測定方法；建立了提取物中生姜蛋白酶活性測定方法，通過均勻設(shè)計(jì)的試驗(yàn)方法研究了生姜蛋白酶活性測定的條件；采用超臨界CO<,2>萃取蛋白酶萃余物中的姜油樹脂，并與生姜的超臨界CO<,2>提取的姜油樹脂及溶劑萃取的姜油樹脂在萃取率、化學(xué)成分、物理性能等方面進(jìn)行了對比

2、研究。 首先通過試驗(yàn)確定了各種分析測試方法，此方面的主要試驗(yàn)和結(jié)論如下。 采用考馬斯亮藍(lán)G-250法測定提取物中生姜蛋白酶的含量。通過試驗(yàn)證明，此方法能正確地測定粗提物中的生姜蛋白酶含量，測試的濃度范圍為10～50μg/ml。 采用酪蛋白消化法測定生姜蛋白酶的酶活力。生姜蛋白酶活力測定的影響因素比較多，經(jīng)分析選取反應(yīng)溫度、pH、底物濃度、酶溶液濃度及激活劑的濃度5個條件進(jìn)行試驗(yàn)研究，以生成物的濃度作為考查目標(biāo)，通

3、過均勻設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)分析，得到了生姜蛋白酶活性測定結(jié)果與測試條件之間的關(guān)聯(lián)方程式，并由此獲得了生姜蛋白酶活性測定的適當(dāng)條件。關(guān)聯(lián)方程式預(yù)報(bào)的最優(yōu)測定條件下，所用生姜蛋白酶樣品酶活力為0.586(以吸光度表示的)，實(shí)際試驗(yàn)結(jié)果為0.565，其方程預(yù)報(bào)值與實(shí)際測試結(jié)果接近。 采用氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定姜油樹脂的化學(xué)成分，測試條件由試驗(yàn)確定，主要考察姜油樹脂中的呈香和姜辣素兩大類成分。 采用標(biāo)準(zhǔn)方法測定姜油樹脂的物理性質(zhì)。

4、 其次，試驗(yàn)研究了溶劑沉淀法提取生姜蛋白酶的合理工藝條件。并采用此條件，以上述分析方法為考查依據(jù)，研究了鮮姜、常溫干燥生姜、冷凍干燥生姜、超臨界CO<,2>萃取姜油樹脂萃余物等各種不同物料狀況下生姜蛋白酶的提取率和活性，研究了物料處理過程對生姜蛋白酶的影響。 以超臨界CO<,2>萃取生姜的萃取率和氣相色譜．質(zhì)譜分析的萃取產(chǎn)物成分為考察目標(biāo)，研究了鮮姜提取生姜蛋白酶后萃余物萃取姜油樹脂的可行性，并與生姜超臨界CO<,2>萃取姜

5、油樹脂及溶劑萃取姜油樹脂對比。同時考察了三種姜油樹脂的相對密度、折光指數(shù)、旋光度等物理性能。提取試驗(yàn)得到的主要結(jié)論如下： 乙醇適合作為提取生姜蛋白酶的溶劑。 生姜蛋白酶溶劑沉淀法提取的分析結(jié)果說明，溶劑加入量越大，產(chǎn)物的提取率和生姜蛋白酶的提取率越高，但是隨著溶劑加入量的增大，生姜蛋白酶的酶活力下降。因此，在提取生姜蛋白酶時，應(yīng)綜合蛋白酶的提取率和活性兩方面考慮溶劑的加入量。 不同物料狀態(tài)下溶劑沉淀法提取生姜蛋白

6、酶的提取率和活性的分析結(jié)果說明，鮮姜經(jīng)過不同的方式干燥經(jīng)超臨界CO<,2>提取姜油樹脂后，萃余物中生姜蛋白酶的提取率和活性比較鮮姜的有所下降，相同活力水平下提取率下降明顯；兩種萃余物中生姜蛋白酶的提取率和活性差別不大：經(jīng)冷凍干燥后，相同活力水平下生姜蛋白酶提取率下降明顯。 生姜蛋白酶萃余物超臨界CO<,2>萃取、生姜超臨界CO<,2>萃取和生姜溶劑萃取三種姜油樹脂的萃取率、化學(xué)成分、物理性質(zhì)的分析結(jié)果說明，蛋白酶萃余物和生姜直接

7、超臨界CO<,2>流體萃取的萃取率相當(dāng)，生姜直接溶劑萃取的萃取率高于超臨界CO<,2>萃??；三個姜油樹脂樣品的主要化學(xué)成分均為倍半萜烯類和姜辣素類，但各類成分含量有所不同，溶劑萃取姜辣素含量最高，蛋白酶萃余物超臨界CO<,2>萃取的次之，生姜直接超臨界CO<,2>萃取的最低；三者的旋光度、折光指數(shù)等物理性質(zhì)無明顯差異，溶劑萃取姜油樹脂的相對密度高于超臨界萃取。說明蛋白酶萃余物超臨界CO<,2>萃取姜油樹脂無論從品質(zhì)、成分及物理性質(zhì)上均與