Dasatinib聯(lián)合奧沙利鉑協(xié)同抑制胃癌細胞增殖.pdf

1、背景與目的：胃癌發(fā)病率和死亡率高，我國早期診斷率不足10％。以手術為主，輔以化療、放療、乃至生物靶向治療等在內的多學科綜合治療成為目前公認的進展期胃癌治療模式。奧沙利鉑在胃癌的化療中占據(jù)重要地位，防止或逆轉奧沙利鉑耐藥備受關注。本研究通過體內外實驗，評價奧沙利鉑對胃癌細胞Src酪氨酸激酶活性的影響，以及Src酪氨酸激酶抑制劑Dasatinib聯(lián)合奧沙利鉑抑制胃癌細胞增殖與遷移等惡性生物學行為的效應。
　　方法：①實時-聚合酶鏈式反

2、應（RT-PCR）及蛋白免疫印跡法（Western Blot）技術檢測胃癌細胞株中Src及其活性形式p-Src的基礎表達；②Western Blot技術檢測不同時間或不同劑量奧沙利鉑作用于胃癌細胞后，胃癌細胞內Src及p-Src的變化規(guī)律；③通過CCK-8體外增殖實驗，評價胃癌細胞暴露于不同濃度奧沙利鉑和Dasatinib后的生長抑制率，并分別計算兩種藥物的 IC50，使用 Calcusyn2.0軟件計算聯(lián)合作用指數(shù) CI（combin

3、ation indices）；④通過細胞集落形成實驗、流式細胞術及細胞劃痕實驗，觀察上述藥物對胃癌細胞體外增殖、細胞周期、凋亡和遷移的影響。⑤建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，分別用奧沙利鉑和/或Dasatinib作用于裸鼠，觀察不同藥物處理對裸鼠皮下移植瘤生長的影響。免疫組織化學染色（IHC）和Western Blot技術，分析不同處理組間Src，p-Src，Ki-67等蛋白的表達差異。
　　結果：①10株胃癌細胞及一株胃粘膜上皮細胞

4、中，SGC-7901、BGC-823、MKN-28細胞株的p-Src/Src基礎表達比值較高；②奧沙利鉑可明顯上調胃癌細胞 p-Src表達，呈時間依賴性，但未顯示劑量依賴性；③低濃度Dasatinib（5nmol/L）作用2h即可幾乎完全抑制胃癌細胞內p-Src表達水平；④Dasatinib和奧沙利鉑在胃癌細胞中的聯(lián)合作用指數(shù)CI值均小于1，且對胃癌細胞生長的抑制效應明顯高于單藥組，提示可協(xié)同抑制胃癌細胞生長；⑤每鏡下視野的胃癌細胞克隆

5、形成數(shù)，對照組、奧沙利鉑組、Dasatinib組、兩藥聯(lián)合組分別為（24±3.6）個、（16±1.5）個、（19±1.7）個和（10±0.6）個，兩藥聯(lián)合組較奧沙利鉑組、Dasatinib組克隆形成數(shù)目減少（P=0.013和P=0.011）；⑥劃痕愈合寬度在對照組、奧沙利鉑組、Dasatinib組、兩藥聯(lián)合組分別為（220±27.1）μm、（189±18.6）μm、（95±17.5）μm和（43±17.3）μm。兩藥聯(lián)合組劃痕愈合能力明

6、顯低于奧沙利鉑組和Dasatinib組（P=0.000和P=0.012）；⑦Dasatinib作用后，胃癌細胞皺縮、變圓、變小，但細胞數(shù)目未見明顯減少；⑧Dasatinib單藥對胃癌細胞周期影響不明顯，但聯(lián)合奧沙利鉑后對比奧沙利鉑單藥組，G1期細胞數(shù)目增多（P=0.002），S期和 G2期細胞數(shù)目減少（P=0.02）；⑨對照組、奧沙利鉑組、Dasatinib組、兩藥聯(lián)合組的裸鼠移植瘤瘤重分別為（3.29±0.52）g、（1.75±0.2

7、2）g、（3.08±0.47）g、（0.56±0.26）g，兩藥聯(lián)合組瘤重明顯低于奧沙利鉑組和Dasatinib組（P=0.013和P=0.009）；IHC結果顯示，腫瘤細胞內Ki-67表達減少；奧沙利鉑組移植瘤組織p-Src表達升高，而聯(lián)合用藥組p-Src表達明顯低于單藥組；不同組間的Src蛋白表達未見差異。
　　結論：奧沙利鉑可上調胃癌細胞p-Src表達，并呈時間依賴性；Src酪氨酸激酶抑制劑 Dasatinib聯(lián)合奧沙利鉑可