腎透明細(xì)胞癌von Hippel-Lindau (VHL)蛋白調(diào)控HIF-1αmRNA表達(dá)的分子機(jī)制.pdf

1、背景:
　　已有的研究認(rèn)為VHL基因在原發(fā)性散發(fā)性腎透明細(xì)胞癌(RCC)發(fā)病中起重要作用,但腫瘤形成機(jī)理仍有較多爭論。VHL存在于細(xì)胞漿,與其他一些蛋白形成E3連接酶復(fù)合物,泛素化降解其他蛋白。缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)是近年來研究較為熱門的與腫瘤形成有關(guān)的因子。在常氧狀態(tài)下,HIFα的脯氨酸羥基化,與VHL蛋白結(jié)合,于是觸發(fā)泛素-蛋白酶體[ubiquitin-proteasome]蛋白水解途徑,使其迅速降解。前期研究發(fā)現(xiàn),在腎癌細(xì)胞

2、株及臨床腎透明細(xì)胞癌中,VHL蛋白促進(jìn)HIF-1αmRNA的表達(dá)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),VHL蛋白對HIF-1α基因轉(zhuǎn)錄具有促進(jìn)作用,但其分子機(jī)制不明,VHL蛋白對HIF-1αmRNA表達(dá)的影響未見文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。前期研究結(jié)果提示,VHL蛋白不僅可以從蛋白水平調(diào)控HIF1α的表達(dá),而且可以從分子水平上調(diào)控HIF-1αmRNA的表達(dá)。
　　目的:
　　基于上述理論背景,本研究目的在于初步求證腎細(xì)胞癌中 VHL蛋白和 HIF-1α基因中的

3、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域有關(guān)聯(lián),并能促進(jìn) HIF-1αmRNA表達(dá),進(jìn)一步明確其分子機(jī)制及意義。
　　方法:
　　Western blot檢測 VHL蛋白表達(dá)量顯示 RCC4 VHL(-)細(xì)胞株 VHL蛋白表達(dá)量為零,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).說明此細(xì)胞株 VHL基因敲除成功。通過實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測, VHL陰性腎癌細(xì)胞株與 VHL陽性腎癌細(xì)胞株存在HIF-1αmRNA的表達(dá)差異,VHL陽性腎癌細(xì)胞株(RCC4T3-14

4、) HIF-1αmRNA的表達(dá)明顯高于陰性腎癌細(xì)胞株(RCC4),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。
　　結(jié)果:
　　通過 Western blot檢測 VHL蛋白表達(dá)量及差異確定 RCC4 VHL(-)細(xì)胞株VHL蛋白表達(dá)量為零,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).說明此細(xì)胞株 VHL基因敲除成功。通過實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測,RCC4 VHL(-)VHL陰性腎癌細(xì)胞株(RCC4)與 VHL陽性腎癌細(xì)

5、胞株(RCC4T3-14)存在 HIF-1αmRNA的表達(dá)差異, VHL陽性腎癌細(xì)胞株(RCC4T3-14) HIF-1αmRNA的表達(dá)明顯高于陰性腎癌細(xì)胞株(RCC4),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。該實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。
　　結(jié)論:
　　VHL蛋白不僅可以從蛋白水平下調(diào) HIF-1α蛋白,而且可以從分子水平促進(jìn)HIF-1αmRNA表達(dá),VHL蛋白的結(jié)構(gòu)提示,pVHL不是一個(gè)直接與 DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,其可能通過一個(gè)