SPOP在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)研究.pdf

1、研究背景:
　　 腎癌，又稱腎細(xì)胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)，起源于腎小管上皮細(xì)胞，是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。每年全世界腎癌死亡病例超過100000例，占所有惡性腫瘤的2％-3％，其中腎透明細(xì)胞癌(renalclearcellcarcinoma)是腎癌最常見的類型，大致占腎癌總發(fā)病數(shù)的80％。尋找特異性高的腎癌分子標(biāo)記物對(duì)于其早期診斷、靶向治療及預(yù)后判斷具有非常重要的意義。
　　 SPOP(

2、speckle-typePOZprotein)是利用硬皮病病人的抗血清，從Hela細(xì)胞的cDNA文庫中篩選出來的新型抗原，其編碼的蛋白質(zhì)分子量為47×103道爾頓，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)呈核內(nèi)散點(diǎn)分布，它作為E3泛素連接酶CUL-3的接頭分子，通過BTB/POZ結(jié)構(gòu)域與CUL-3相結(jié)合，并通過MATH結(jié)構(gòu)域聚合底物蛋白，從而在蛋白質(zhì)的泛素化和降解中起著重要作用。目前已發(fā)現(xiàn)的可以通過CUL/SPOP復(fù)合體進(jìn)行泛素化的底物包括PDX-1，MacroH2

3、A，Daxx以及Gli2，Gli3等，同時(shí)，SPOP自身也可以作為底物進(jìn)行泛素化修飾和降解。近年來，SPOP與多種腫瘤發(fā)生及演進(jìn)的關(guān)系越來越受到重視，SPOP在腫瘤的發(fā)生、演進(jìn)中可能發(fā)揮多方面的作用，其機(jī)制較為復(fù)雜，是研究腫瘤機(jī)理的一個(gè)重要因子。然而在國內(nèi)尚未有SPOP在人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞及組織中表達(dá)的相關(guān)研究報(bào)道。
　　 研究目的:
　　 研究SPOP在人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株A498及KRC/Y、人原代腎癌細(xì)胞、人腎透明

4、細(xì)胞癌組織及正常腎組織中的表達(dá)情況;并初步探討SPOP表達(dá)與人腎透明細(xì)胞癌病理分化程度的關(guān)系。
　　 研究方法:
　　 人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株A498及KRC/Y由山東大學(xué)第二醫(yī)院徐大為教授惠贈(zèng)。人腎透明細(xì)胞癌組織來源于山東大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科2010年10月-2011年9月腎癌患者手術(shù)標(biāo)本，正常對(duì)照來源于同一腎臟，距腫瘤邊緣5cm以上（所取標(biāo)本均經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和患者知情同意），所有患者術(shù)前均未行放化療。所取腎癌組織一

5、部分經(jīng)0.25％胰蛋白酶消化，調(diào)整至合適密度（5×105個(gè)/ml）種植至纖維連接蛋白包被培養(yǎng)瓶培養(yǎng)人原代腎癌細(xì)胞。采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株A498、KRC/Y及病人來源的原代腎癌細(xì)胞中SPOP蛋白的表達(dá)情況。所取腎癌患者手術(shù)標(biāo)本另一部分經(jīng)固定后采用HE染色診斷腫瘤病理分級(jí)，分別采用免疫組織化學(xué)方法、Western蛋白印跡法定性及定量檢測(cè)人腎透明細(xì)胞癌及正常腎組織中SPOP蛋白的表達(dá)水平。采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)

6、行結(jié)果分析，行方差分析及t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 (1)人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株A498及KRC/Y傳代后，制備細(xì)胞爬片后經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色后顯微鏡下觀察，SPOP在腎癌細(xì)胞株A498及KRC/Y中均呈陽性表達(dá)。人腎透明細(xì)胞癌組織傳代后，制備細(xì)胞爬片后經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色后顯微鏡下觀察，SPOP在原代腎癌細(xì)胞中呈陽性表達(dá)。
　　 (2)24例腎透明細(xì)胞癌經(jīng)HE染色后顯微鏡下觀察，14

7、例高分化、5例中分化、5例低分化腎透明細(xì)胞癌;11例正常的腎組織經(jīng)病理診斷均為正常腎臟組織。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色，SPOP在14例高分化、5例中分化及5例低分化腎透明細(xì)胞癌中均為陽性表達(dá)，11例正常腎組織均為陰性。腎透明細(xì)胞癌中SPOP蛋白的表達(dá)水平(0.7038±0.1443)高于正常腎組織（陰性）的表達(dá)水平(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SPOP蛋白在高分化腎透明細(xì)胞癌(0.7068±0.1525)、中分化腎透明細(xì)胞癌(0.634