Math1誘導(dǎo)的前庭毛細(xì)胞再生的轉(zhuǎn)分化過程與細(xì)胞增殖.pdf

1、目的：
　　1)檢驗前庭膜性迷路對腺病毒載體的通透性,從而探索在外淋巴中直接給腺病毒載體對于內(nèi)耳毛細(xì)胞再生研究的可行性。
　　2)新生鼠的耳蝸上皮轉(zhuǎn)染math1產(chǎn)生異位新生的毛細(xì)胞,本實驗為了解前庭上皮細(xì)胞是否存在同樣的具有分化潛能的感覺上皮。
　　3)探索math1誘導(dǎo)的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化的形態(tài)學(xué)過程及分化條件、特點。
　　方法：
　　Ad-math1-EGFP載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)染前庭上皮后表達的mat

2、h1蛋白的檢測;本實驗以鼠為研究對象,以中路窩途徑快速采集標(biāo)本,分別建立前庭膜迷路整體培養(yǎng)和前庭終器培養(yǎng)的模型,并檢驗兩個不同模型轉(zhuǎn)染Ad-math1-EGFP載體后的效應(yīng);采用前庭終器培養(yǎng)的模型,使正常培養(yǎng)的前庭上皮感染Ad-math1-EGFP,對轉(zhuǎn)染病毒后不同時間點的標(biāo)本固定,部分采取冰凍切片,運用免疫組織化學(xué)進行染色后觀察、采集實驗數(shù)據(jù);采用前庭終器培養(yǎng),并建立高、低增殖活性的前庭感覺上皮的模型,分別將它們轉(zhuǎn)染Ad-math1-

3、EGFP,一定時間后固定、免疫組織化學(xué)染色后觀察、采集實驗數(shù)據(jù);本實驗以萊卡熒光顯微鏡、SP2或者SP5的共聚焦顯微鏡對標(biāo)本進行觀察并采集實驗數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1)體外培養(yǎng),膜迷路整體模型和前庭終器培養(yǎng)模型的首次建立。前者,盡量保持前庭膜迷路的完整性并將它們貼壁培養(yǎng),培養(yǎng)液中給腺病毒載體,模擬在體時外淋巴給病毒;后者,去除前庭的膜性非感覺上皮并將剩余的感覺上皮貼壁培養(yǎng),培養(yǎng)液中給腺病毒載體,模擬在體時內(nèi)淋巴給病毒。

4、r>　　2)膜迷路整體培養(yǎng)模式,培養(yǎng)液中給Ad-math1-EGFP載體,上皮細(xì)胞在非感覺上皮區(qū)出現(xiàn)極少量毛細(xì)胞樣的細(xì)胞;前庭終器培養(yǎng)模式,培養(yǎng)液中給Ad-math1-EGFP載體,非感覺上皮區(qū)有大量的方格狀細(xì)胞出現(xiàn),并在此處出現(xiàn)大量的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞。
　　3)異位新生的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞具有纖毛,多成簇出現(xiàn),部分細(xì)胞共用一簇纖毛;細(xì)胞形態(tài)多樣,呈現(xiàn)為多邊形態(tài)、毛細(xì)胞樣的形態(tài)及兼有二者特點的柱狀。
　　4)機械損傷的前庭終器,在

5、損傷處的支持細(xì)胞增殖且在math1誘導(dǎo)下出現(xiàn)新生的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞;正常培養(yǎng)的前庭終器感覺上皮區(qū)極少數(shù)增殖細(xì)胞且在math1誘導(dǎo)下未見新生的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞;慶大霉素造模后前庭終器感覺上皮區(qū)幾乎沒有增殖細(xì)胞且在math1誘導(dǎo)下未見新生的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞。
　　5)Math1誘導(dǎo)的新生毛細(xì)胞樣的細(xì)胞多來源于一些高增殖活性、方格狀的細(xì)胞,其分化的過程中多不經(jīng)歷細(xì)胞的增殖,但分裂中的細(xì)胞有可能被轉(zhuǎn)染并具備毛細(xì)胞的特點。
　　結(jié)論：

6、>　　1)前庭膜性迷路是阻止腺病毒載體從外淋巴進入內(nèi)淋巴的屏障。
　　2)新生鼠的前庭上皮中存在一類高增殖活性的細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)時,它們可以遷延、增殖,并在mathl誘導(dǎo)下可轉(zhuǎn)分化為異位的毛細(xì)胞樣細(xì)胞。
　　3)具有高增殖潛能的前體細(xì)胞轉(zhuǎn)染math1后易產(chǎn)生毛細(xì)胞樣的細(xì)胞。
　　4)math1誘導(dǎo)的毛細(xì)胞樣的細(xì)胞的過程是一個不依賴于細(xì)胞增殖的轉(zhuǎn)分化的過程。
　　5)毛細(xì)胞樣的細(xì)胞形態(tài)多樣,并具備其行使功能的基本結(jié)構(gòu)