成骨細(xì)胞與誘導(dǎo)劑對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增殖與成骨分化的影響.pdf

1、目的:研究成骨細(xì)胞與誘導(dǎo)劑對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞(MSCs)的增殖與分化的影響,探索一種新的骨組織工程種子細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系.方法:骨髓基質(zhì)細(xì)胞由于其強(qiáng)大增殖能力及多向分化潛能而成為骨組織工程的種子細(xì)胞.本實(shí)驗(yàn)研究乳大鼠顱骨來(lái)源的成骨細(xì)胞與誘導(dǎo)劑(地塞米松、β-甘油磷酸鈉、抗壞血酸)對(duì)大鼠股骨、脛骨來(lái)源的MSCs生長(zhǎng)的影響.實(shí)驗(yàn)共分4組,對(duì)照組:DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)MSCs;誘導(dǎo)劑組:成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)MSCs;成骨細(xì)胞組:在DMEM培養(yǎng)液中通過(guò)插入

2、式培養(yǎng)皿以2:1的比例間接混合培養(yǎng)MSCs和成骨細(xì)胞,細(xì)胞因子可通過(guò)培養(yǎng)皿底部半透膜的微孔;聯(lián)合誘導(dǎo)組:在成骨誘導(dǎo)液中進(jìn)行如成骨細(xì)胞組的細(xì)胞間接混合培養(yǎng).計(jì)數(shù)培養(yǎng)8d內(nèi)每天的MSCs數(shù)量,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;檢測(cè)培養(yǎng)10d時(shí)MSCs的堿性磷酸酶(ALP)活性;檢測(cè)細(xì)胞總蛋白量,計(jì)算ALP相對(duì)活性(即單位質(zhì)量蛋白的ALP活性):采用逆轉(zhuǎn)錄酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)培養(yǎng)2w后MSCs的骨鈣素(OC)mRNA的表達(dá)量.結(jié)果:生長(zhǎng)曲線顯示8d內(nèi)

3、4組細(xì)胞數(shù)量均隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而增加.3個(gè)誘導(dǎo)組分別與對(duì)照組比較:后4d內(nèi)誘導(dǎo)劑組的細(xì)胞數(shù)量少于對(duì)照組而成骨細(xì)胞組的細(xì)胞數(shù)量高于對(duì)照組(P<0.05);8d內(nèi)聯(lián)合誘導(dǎo)組與對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)量相比均無(wú)顯著性差異(P>0.05).培養(yǎng)10d時(shí)4組均表達(dá)ALP,4組中聯(lián)合誘導(dǎo)組的ALP活性最高(P<0.05).誘導(dǎo)劑組與聯(lián)合誘導(dǎo)組的ALP相對(duì)活性均高于成骨細(xì)胞組(P<0.05),而誘導(dǎo)組與成骨細(xì)胞組之間的ALP相對(duì)活性比較無(wú)顯著性差異(P>0.05

4、).成骨細(xì)胞組的ALP活性及ALP相對(duì)活性與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.培養(yǎng)2w時(shí)對(duì)照組不表達(dá)骨鈣素mRNA而3個(gè)誘導(dǎo)組均表達(dá),誘導(dǎo)劑組的骨鈣素mRNA的表達(dá)要明顯高于成骨細(xì)胞組(P<0.05),聯(lián)合誘導(dǎo)組與誘導(dǎo)劑組的骨鈣素mRNA比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論:間接混合培養(yǎng)狀態(tài)下成骨細(xì)胞促進(jìn)MSCs增殖作用強(qiáng)而誘導(dǎo)MSCs成骨分化作用弱,誘導(dǎo)劑抑制MSCs增殖而誘導(dǎo)MSCs成骨分化作用強(qiáng).聯(lián)合使用成骨細(xì)胞與誘導(dǎo)劑,發(fā)揮成骨細(xì)胞的促增殖作用和誘導(dǎo)