氟尿嘧啶植入劑(中人氟安)抗小鼠腹水瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：惡性腹腔積液及腹膜轉(zhuǎn)移癌是晚期惡性腫瘤的常見(jiàn)并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存期，治療很棘手。腹腔內(nèi)化療具有特殊的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)及諸多優(yōu)點(diǎn)，業(yè)已成為治療惡性腹腔積液及腹膜轉(zhuǎn)移癌的重要方法。氟尿嘧啶(5-Fu)注射液是腹腔內(nèi)化療的常用藥物，腹腔內(nèi)給藥后其半衰期僅3.8小時(shí)，影響療效，而氟尿嘧啶植入劑(中人氟安)是一種新型5-Fu緩釋制劑，其有效作用時(shí)間長(zhǎng)達(dá)15天，在治療惡性腹腔積液及腹膜轉(zhuǎn)移癌方面具有潛在的臨床價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)擬

2、通過(guò)腹腔內(nèi)給予不同劑量的中人氟安，觀察其對(duì)H22小鼠腹水瘤的療效和安全性，探討其最佳劑量；對(duì)中人氟安和普通5-Fu注射液抗H22小鼠腹水瘤作用進(jìn)行對(duì)比，探討兩種劑型在有效性、安全性及其作用機(jī)制上的差異，旨在為臨床上應(yīng)用中人氟安治療惡性腹腔積液及腹膜轉(zhuǎn)移癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：ICR小鼠腹腔注射肝癌H22細(xì)胞懸液0.2mL(含細(xì)胞數(shù)約2.0×106)，建立小鼠腹水瘤模型。分為：(1)68只ICR腹水瘤模型小鼠，隨機(jī)分為四組，

3、每組17只，即賦型劑對(duì)照組，低劑量(2mg/只)、中劑量(4mg/只)和高劑量(6mg/只)中人氟安組。嚴(yán)密觀察各組小鼠的一般狀態(tài)、體重變化、毒副反應(yīng)和生存期，計(jì)算腹水體積和鏡下腹水中每毫升腫瘤細(xì)胞數(shù)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠腹水腫瘤細(xì)胞凋亡率和S期細(xì)胞比例。(2)68只ICR腹水瘤模型小鼠，隨機(jī)分為四組，每組17只，即賦型劑對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組、中人氟安組(4mg/只)和普通5-Fu組(4mg/只)。除觀察和檢測(cè)上述指標(biāo)外，還采用實(shí)時(shí)

4、熒光定量RT-PCR(QRT-PCR)和Westernbloting分別從mRNA與蛋白水平檢測(cè)各組小鼠腹水中腫瘤細(xì)胞bcl-2、bax基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：(1)與賦型劑對(duì)照組相比，中人氟安各劑量組小鼠的一般狀態(tài)較好，腹水生長(zhǎng)和體重增長(zhǎng)緩慢，全身癥狀出現(xiàn)較晚。中人氟安各劑量組的中位生存期均較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(16.0、20.0和20.0天vs.13.0天，P<0.01)，但中、高劑量組之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。與低

5、、中劑量組相比，高劑量組小鼠出現(xiàn)化療相關(guān)毒副反應(yīng)的比例較高(11.76％和17.65％vs.35.29％，P<0.05)。與賦形劑對(duì)照組相比，中人氟安各劑量組的腹水體積(9.2±0.9、5.6±1.0和5.9±1.1ml vs.13.3±1.5ml)和每毫升腹水中的腫瘤細(xì)胞數(shù)(10.11±1.31、7.25±1.00和7.47±1.11×108 vs.14.73±1.25×108)均較少(P<0.01)，腹水腫瘤細(xì)胞凋亡率(14.8±1

6、.4％、23.9±2.6％和21.5±3.1％vs.7.6±1.9)和S期細(xì)胞比例(31.23±3.26％、50.17±4.60％和47.08±4.11％vs.20.57±4.08)均較高(P<0.01)，其中，中、高劑量組與低劑量組之間具有顯著差異(P<0.05)，而中、高劑量組之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。(2)與兩個(gè)對(duì)照組相比，中人氟安組和普通5-Fu組小鼠的一般狀態(tài)較好，腹水生長(zhǎng)和體重增長(zhǎng)緩慢，全身癥狀出現(xiàn)較晚，生存期延長(zhǎng)(1

7、4.0和13.0天vs.21.0和19.0天，P<0.01)，其中，中人氟安組中位生存期較普通5-Fu組延長(zhǎng)(P<0.05)，而兩組出現(xiàn)化療相關(guān)毒副反應(yīng)的小鼠的比例無(wú)明顯差異(17.64％vs.23.52％，P>0.05)。中人氟安組和普通5-Fu組的腹水體積、每毫升腹水中的腫瘤細(xì)胞數(shù)均較兩對(duì)照組減少(5.1±0.7和7.8±0.9mlvs.12.9±1.0和13.5±1.2ml；7.02±0.98和7.86±1.05×108 vs.1

8、4.07±1.19和14.28±1.20×108，P均<0.01)，其中，中人氟安組的腹水體積明顯少于普通5-Fu組(P<0.05)，但兩組的每毫升腹水中的腫瘤細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯差異(P>0.05)。中人氟安組的腫瘤細(xì)胞凋亡率和S期細(xì)胞比例(24.9±5.0％和52.19±4.60％)均高于普通5-Fu組(20.1±4.5％和39.25±5.84％，P均<0.05)，同時(shí)，前者bcl-2基因的mRNA與蛋白表達(dá)均較后者減少(△Ct值：9.57

9、±0.67 vs.7.11±0.35，灰度值：0.22±0.029 vs.0.46±0.480，P均<0.05)，而bax基因的mRNA與蛋白表達(dá)均較后者增多(△Ct值：2.05±0.21vs.3.72±0.53，灰度值：0.55±0.026 vs.0.34±0.018，P均<0.05)，兩對(duì)照組之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：(1)氟尿嘧啶植入劑(中人氟安)對(duì)小鼠H22腹水瘤具有明顯的抑制作用，以中劑量組的效果最