2型豬鏈球菌lmb-htp操縱子的鑒定及其編碼蛋白作為疫苗候選分子的研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,簡稱S.suis)是一種重要的人獸共患病病原菌。2型豬鏈球菌(S.suis2)是35個血清型中臨床分離率最高和致病性最強的血清型,近年來在全世界范圍內(nèi)多個國家流行,給全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失;并且還多次出現(xiàn)S.suis2感染人并導致中毒性休克綜合癥的報道,造成了嚴重的公共衛(wèi)生事件。因此,加強對S.suis2感染的預防和控制成為一個亟待解決的問題。由于目前對S.suis2的致病機制尚不明

2、確,再加上近年來多重耐藥菌株的出現(xiàn),對S.suis2的預防和控制尚沒有有效的藥物和治療措施。
　　 疫苗作為防控病原菌的安全有效的手段成為應對S. Suis2感染的研究熱點。而以細菌表面蛋白為靶標的亞單位疫苗由于安全性高和生產(chǎn)成本低備受青睞。
　　 最近在肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌和無乳鏈球菌等鏈球菌中發(fā)現(xiàn)的lmb-htp操縱子編碼兩個表面蛋白,分別是層粘連蛋白結(jié)合蛋白(Laminin binding protein,Lmb

3、)和組氨酸三聚體蛋白(Histidine triad protein.,Htp)。這兩個蛋白都有鋅離子結(jié)合特性,同時,每個蛋白又具有各自獨特的生物學功能。Lmb能結(jié)合人層粘連蛋白,促進細菌對宿主的黏附和侵襲;Htp能夠結(jié)合補體H因子,抑制補體C3在細菌表面的沉積,從而促進細菌逃避免疫系統(tǒng)的殺傷。由于這兩個蛋白都高度保守,位于細菌表面并具有較好的免疫原性,被認為是疫苗開發(fā)的候選分子。尤其是在肺炎鏈球菌中,Htp蛋白己經(jīng)被應用于一個多價疫苗

4、的研究。但是迄今為止還沒有關于S.suis2 lmb-htp操縱子的報道及其編碼蛋白免疫保護性的研究。
　　 本研究通過對S.suis2中國強毒株05ZYH33的全基因組序列分析,發(fā)現(xiàn)了lmb和htp的同源基因,并通過生物信息學分析和實驗證實了它們共轉(zhuǎn)錄,組成S.suis2的lmb-htp操縱子。該發(fā)現(xiàn)為S.suis2的致病機制和免疫逃避的闡明提供了新的研究方向。PCR檢測還發(fā)現(xiàn)lmb-htp操縱子存在于所有被檢測的S.suis

5、2不同地域和毒力的分離株中,并且在大多數(shù)不同血清型的S.suis中都有存在。同時本研究通過原核表達、純化獲得了重組Lmb和HtpS蛋白,并證實這兩個蛋白在S.suis2感染宿主時表達,刺激機體產(chǎn)生相應的抗體。全血殺菌及補體結(jié)合試驗還發(fā)現(xiàn)兔抗HtpS血清不但能增強全血對S.suis2的殺傷作用,還能促進補體C3在細菌表面的沉積。利用小鼠模型對Lmb和HtpS蛋白的免疫保護性進行研究發(fā)現(xiàn),它們都能在小鼠模型中發(fā)揮保護作用,可以作為疫苗開發(fā)的