高氟干擾T淋巴細(xì)胞分化定向蛋白質(zhì)相互作用研究.pdf

1、地氟病作為目前我國(guó)流行最廣泛，并且嚴(yán)重危害到人類健康與動(dòng)物生命的一種的地方病和多發(fā)病，是由長(zhǎng)時(shí)間攝入高濃度的氟引起的。大量研究表明，高氟可造成機(jī)體的廣泛性損傷，包括免疫系統(tǒng)。本研究通過(guò)向小鼠飲水中添加不同劑量的氟（0mg/L，50mg/L，100mg/L）建立動(dòng)物模型。采用透射電鏡、流式細(xì)胞術(shù)、iTRAQ和Real-time PCR等技術(shù)，從血清學(xué)，組織病理形態(tài)學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和蛋白組學(xué)等角度研究了高氟的免疫毒性作用。具體結(jié)果如下：

2、>　　1．氟對(duì)小鼠血常規(guī)和胸腺超微結(jié)構(gòu)的影響高氟可抑制小鼠的體增重，并造成胸腺超微結(jié)構(gòu)的損傷，表現(xiàn)為核染色質(zhì)減少、固縮，細(xì)胞膜核膜的雙層膜結(jié)構(gòu)不明顯，細(xì)胞質(zhì)濃縮出現(xiàn)空泡化，線粒體脊斷裂、結(jié)構(gòu)破壞等。血常規(guī)檢查結(jié)果顯示高氟可導(dǎo)致小鼠的外周血 WBC數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中間細(xì)胞數(shù)和粒細(xì)胞數(shù)目顯著下降，改變淋巴細(xì)胞及粒細(xì)胞的比例，表明氟可以影響機(jī)體的免疫狀態(tài)，這與胸腺損傷的結(jié)果相一致。
　　2．氟對(duì)小鼠 T細(xì)胞亞群的的影響采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

3、小鼠胸腺 T細(xì)胞亞群的變化，結(jié)果顯示，高劑量的氟可導(dǎo)致胸腺 CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞的比例下降，且差異顯著，而 DP細(xì)胞在兩個(gè)氟處理組內(nèi)的比例上升，DN細(xì)胞在氟處理組中有下降趨勢(shì)，證實(shí)了高氟可以影響胸腺 T細(xì)胞的分化，抑制了 CD4+或CD8+單陽(yáng)性細(xì)胞的生成。
　　3．氟對(duì)小鼠胸腺蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的影響 iTRAQ實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高氟誘導(dǎo)350多個(gè)蛋白發(fā)生差異表達(dá)。進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析表明，這些蛋白主要分布于11

4、0多個(gè)信號(hào)通路，其中參與細(xì)胞代謝的有30多條，涉及70多個(gè)差異蛋白；參與信號(hào)調(diào)控通路的有50多，涉及160多個(gè)差異蛋白，參與疾病發(fā)生的有19條通路，涉及60多個(gè)蛋白。這些蛋白表達(dá)的紊亂可以影響胸腺細(xì)胞的生物過(guò)程，進(jìn)而干擾T細(xì)胞的分化。
　　4．氟對(duì)小鼠T細(xì)胞分化關(guān)鍵基因mRNA表達(dá)的影響實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證差異蛋白 mRNA表達(dá)影響的結(jié)果顯示，高氟可抑制 Rps3、Rps3a及Pfn1 mRNA的表達(dá)，并促進(jìn) Nefh和 N