富血小板血漿和帶血管肌筋膜在組織工程骨血管化中的作用.pdf

1、本文探討了富血小板血漿和帶血管肌筋膜在組織工程骨血管化中的作用。 [目的] 1、分離培養(yǎng)犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，體外擴(kuò)增并向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化，探討其作為骨組織工程種子細(xì)胞的可能性。 2、制備犬同種異體脫鈣骨基質(zhì)(demineralizedbonematrix，DBM)，研究DBM作為骨組織工程支架材料的可能性。 3、研究應(yīng)用富血小板血漿(platelet-

2、richplasma,PRP)、帶血管肌筋膜對(duì)組織工程骨血管化的影響. [方法] 1、從犬骨髓分離MSCs，體外培養(yǎng)擴(kuò)增，并用含地塞米松(10mol/L)，β-甘油磷酸鈉(10mmol/L)和維生素C(50mg/L)的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。成骨誘導(dǎo)細(xì)胞行改良鈣鈷法堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)染色，并應(yīng)用VonKossa法、茜素紅法

3、進(jìn)行鈣結(jié)節(jié)染色。 2、雜種犬的股骨行脫脂、脫鈣、脫非膠原蛋白、冷凍干燥、滅菌制成DBM，與MSCs復(fù)合，分別在不同時(shí)間應(yīng)用倒置顯微鏡、掃描電鏡觀察脫鈣骨基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及細(xì)胞在材料表面的生長(zhǎng)情況。 3、將DBM/MSCs復(fù)合體植入12只犬背部，根據(jù)是否加入PRP和被帶血管肌筋膜包裹分為4組。分別在術(shù)后4周、8周12周各處死4只犬，行大體標(biāo)本、X線、組織學(xué)檢查。 [結(jié)果] 1、用密度梯度法分離的MSCs，細(xì)胞純度

4、高，增殖能力活躍，誘導(dǎo)成骨分化的MSCs由梭形、三角形變?yōu)樽優(yōu)榉叫?、多角形，其ALP及鈣結(jié)節(jié)染色均為陽性。犬MSCs和成骨誘導(dǎo)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線呈典型的S形。 2、同種異體脫鈣骨基質(zhì)具有三維立體網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，平均孔隙自徑約為254.39±88.71μm，孔隙率約70％。與MSCs復(fù)合培養(yǎng)后，細(xì)胞黏附其上，上架率高，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，增殖迅速，分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)。 3、各時(shí)間點(diǎn)A組、B組、C組在成骨的量、骨光密度、血管化程度均明顯優(yōu)于