TREM-2對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞增殖與凋亡的影響及VIP的調(diào)控.pdf

1、髓樣細(xì)胞表達(dá)的觸發(fā)受體-2(TREM-2)是2000年發(fā)現(xiàn)的髓樣細(xì)胞表達(dá)觸發(fā)受體家族成員，主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等細(xì)胞。TREM-2通過(guò)激活細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)，可活化部分T細(xì)胞;同時(shí)ERK信號(hào)通路參與抑制脂多糖（LPS）刺激后樹(shù)突狀細(xì)胞的凋亡。血管活性腸肽(VIP)是肺內(nèi)重要的神經(jīng)調(diào)節(jié)肽。VIP是否可通過(guò)影響TRE

2、M-2的表達(dá)，影響細(xì)胞的凋亡和增殖尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 目的：觀(guān)察TREM-2與小鼠成纖維細(xì)胞凋亡和增殖的關(guān)系，初步探討VIP對(duì)LPS應(yīng)激的小鼠成纖維細(xì)胞TREM-2表達(dá)的影響及其機(jī)制。
　　 方法：⑴構(gòu)建TREM-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，按以下分組瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至小鼠成纖維細(xì)胞：對(duì)照組、空質(zhì)粒組和TREM-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組。采用熒光顯微鏡觀(guān)察12 h和24 h小鼠成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率;采用RT-PCR檢測(cè)小鼠成纖維細(xì)胞中TREM-2 mR

3、NA的表達(dá);采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期；LPS組、LPS+轉(zhuǎn)染試劑組、LPS+空質(zhì)粒組和LPS+TREM-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組。采用PI染色細(xì)胞檢測(cè)小鼠成纖維細(xì)胞的凋亡。⑵采用RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)分別從mRNA和蛋白水平檢測(cè)VIP對(duì)LPS應(yīng)激的小鼠成纖維細(xì)胞TREM-2表達(dá)的影響;并觀(guān)察PKC信號(hào)通路阻斷劑(H-7)、PKA信號(hào)通路阻斷劑(H-89)、MAPK信號(hào)通路阻斷劑(PD98059)和CaM信號(hào)通路阻斷劑(W-7)

4、對(duì)上述作用的影響。
　　 結(jié)果：①熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染12 h后，在小鼠成纖維細(xì)胞中觀(guān)察到綠色熒光;24h時(shí)發(fā)綠色熒光的小鼠成纖維細(xì)胞比例約30％。②RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組（0.22±0.03）和空質(zhì)粒組（0.25±0.03）相比，TREM-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組小鼠成纖維細(xì)胞中TREM-2mRNA的表達(dá)（1.02±0.14）明顯升高(p＜0.01)。③流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示:與空質(zhì)粒組（16.11±1.52）％相比，T

5、REM-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組小鼠成纖維細(xì)胞處于G2/M期的比率（21.98±2.23）％明顯增加(p＜0.05)。④PI染色細(xì)胞檢測(cè)凋亡結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，加入LPS應(yīng)激后，成纖維細(xì)胞中凋亡細(xì)胞明顯增多;與LPS組相比，LPS+空質(zhì)粒組凋亡細(xì)胞比例無(wú)明顯變化，而LPS+TREM-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組的凋亡細(xì)胞明顯減少。⑤RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:LPS降低小鼠成纖維細(xì)胞TREM-2mRNA的表達(dá)(p＜0.05)，VIP可呈時(shí)間依賴(lài)性(0h、3h

6、、6h、12h、24 h)上調(diào)TREM-2 mRNA的表達(dá)，且在6h達(dá)到峰值(p＜0.01);并呈劑量相關(guān)性（10-10 mol/L、10-9mol/L、10-8 mol/L、107 mol/L）上調(diào)TREM-2 mRNA的表達(dá)，以10-8 mol/L作用最明顯(p＜0.01)。VIP(10-8 mol/L)對(duì)LPS應(yīng)激6h增加小鼠成纖維細(xì)胞TREM-2mRNA表達(dá)的效應(yīng)可被H-7、H-89、PD98059和W-7所阻斷(p＜0.05)

7、。⑥流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:LPS降低小鼠成纖維細(xì)胞TREM-2蛋白的表達(dá)（6848±1723.15;p＜0.05），VIP可上調(diào)TREM-2蛋白的表達(dá)(23618±2888.44; p＜0.01)。VIP(10-8 mol/L)對(duì)LPS應(yīng)激6h增加小鼠成纖維細(xì)胞TREM-2蛋白表達(dá)的效應(yīng)可被H-7、H-89、PD98059和W-7所阻斷(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴TREM-2促進(jìn)小鼠成纖維細(xì)胞的增殖。⑵TREM-2抑制小鼠成