IN-1及NT-3聯(lián)合作用后軸突再生修復(fù)與c-fos、c-jun基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的關(guān)系.pdf

1、脊髓損傷后截癱病人的治療是目前臨床治療中的重大課題，影響神經(jīng)再生和有效修復(fù)的因素相當(dāng)復(fù)雜，損傷區(qū)膠質(zhì)瘢痕形成、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏、抑制軸突生長(zhǎng)乃至妨礙軸突正確尋靶的抑制性分子的存在、促損傷基因的過(guò)度表達(dá)以及抗損傷基因和促軸突生長(zhǎng)基因的表達(dá)不足等因素均能影響中樞神經(jīng)再生。對(duì)脊髓損傷后修復(fù)研究的現(xiàn)狀和趨勢(shì)主要圍繞以下幾個(gè)方面：①促進(jìn)誘導(dǎo)軸突的生長(zhǎng)，如給予多種促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子或促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)、為再生的軸突提供橋梁及管道、提供能

2、支持引導(dǎo)神經(jīng)生長(zhǎng)的雪旺氏細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)成分。②消除抑制軸突生長(zhǎng)的因素，這些抑制因素主要與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓磷脂及損傷后形成的空洞和膠質(zhì)瘢痕有關(guān)。 IN-1為髓磷脂相關(guān)生長(zhǎng)阻逆蛋白抗體，目前國(guó)內(nèi)外學(xué)著都傾向于其對(duì)抗相應(yīng)抗原方面的研究，但其促進(jìn)軸突生長(zhǎng)是否還有其他的機(jī)制?為此，本實(shí)驗(yàn)從另一個(gè)角度出發(fā)，通過(guò)IN-1以及和NT-3聯(lián)合作用，觀察其是否會(huì)對(duì)即刻早期基因c-fos及c-jun的表達(dá)產(chǎn)生影響，并且從多個(gè)方面對(duì)脊髓損傷恢復(fù)程度進(jìn)

3、行評(píng)價(jià)。 第一章IN-1及NT-3聯(lián)合作用后c-fos及c-jun表達(dá)的變化 目的：從基因及蛋白水平探討脊髓損傷后給予IN-1以及和NT-3聯(lián)合作用后c-fos及c-jun的表達(dá)有無(wú)變化。 材料和方法：清潔型Sprague-Dawley(sD)大鼠240只，隨機(jī)分為手術(shù)對(duì)照組(n=80)、IN-1組(n=80)及IN-1和NT-3組聯(lián)合作用組(n=80)。每個(gè)組中大鼠按照手術(shù)后時(shí)間隨機(jī)平均分為15min、30mi

4、n、1h、2h、4h、6h、8h、12h 8個(gè)小組，每個(gè)小組10只。所有大鼠在相當(dāng)于T<,8>椎板水平用做好標(biāo)記的顯微剪刀剪斷脊髓的背側(cè)2/3。手術(shù)對(duì)照組、IN-1組和聯(lián)合作用組在脊髓橫斷處頭側(cè)分別注入生理鹽水、IN-1及工N-1和NT-3。所有大鼠在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死，取出脊髓組織。其中5只用RT-PeR檢測(cè)c-fos、c-jun基因的表達(dá)，另外5只用Western blot檢測(cè)c-fos、c-jun蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：NT-3、

5、IN-1作用機(jī)制之一可能通過(guò)抑制c-fos表達(dá)，促進(jìn)c-jun表達(dá)對(duì)脊髓損傷起保護(hù)作用。 第二章 IN-1及NT-3聯(lián)合作用后促軸突生長(zhǎng)相關(guān)基因表達(dá)的變化 目的：研究IN-1及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后GAP-43、NGF、bFGF基因表達(dá)的變化。 材料和方法：清潔型SD大鼠90只，隨機(jī)分為手術(shù)對(duì)照組(n=30)、IN-1組(n=30)及IN-1和NT-3組聯(lián)合作用組(n=30)，每組又按照手術(shù)后時(shí)間隨機(jī)平均分為1d、4

6、d、7d、14d、21d和28d六個(gè)小組，每個(gè)小組5只。所有大鼠首先行蛛網(wǎng)膜下腔置管，然后在相當(dāng)于T<,8>椎板水平用做好標(biāo)記的顯微剪刀剪斷脊髓的背側(cè)2/3。其中手術(shù)對(duì)照組通過(guò)置管每天注入生理鹽水30μl，而IN-1組每天用注入IN-1 24μ1，IN-1和NT-3聯(lián)合作用組，每天注入IN-1 24μl和NT-33μl，每天分為早、中、晚三次注射，最長(zhǎng)持續(xù)1周。分別于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物，用RT-PCR檢測(cè)GAP-43、NGF、bFGF基

7、因表達(dá)的變化，結(jié)果采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：IN-1以及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后可能通過(guò)上調(diào)GAP-43、NGF、bFGF mRNA的表達(dá)，從而對(duì)脊髓損傷后軸突再生起一定的促進(jìn)作用。 第三章脊髓損傷后脊髓功能恢復(fù)的評(píng)價(jià) 目的：從多個(gè)角度對(duì)給予IN-1及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后脊髓功能恢復(fù)的情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。 材料和方法：清潔型SD大鼠18只，隨機(jī)分為手術(shù)對(duì)照組(n=6)、IN

8、-1組(n=6)及IN-1和NT-3組聯(lián)合作用組(n=6)，動(dòng)物模型的制作、給藥途徑及時(shí)間同第二章。但所有大鼠于術(shù)后14d時(shí)在右側(cè)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)皮層注射示蹤劑BDA順行示蹤C(jī)ST纖維。在手術(shù)前及手術(shù)后1d、1w、2w、3w及4w，采用BBB(Basso)評(píng)分評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)功能，然后取出脊髓組織采用免疫組化染色觀察神經(jīng)元中絲蛋白(NF)及膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)、HE染色及：BDA組織化學(xué)反應(yīng)。 結(jié)論：IN-1及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后可

9、以促進(jìn)脊髓損傷后軸突的再生，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。 本實(shí)驗(yàn)采用皮質(zhì)脊髓束橫斷模型，探討了IN-1以及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后對(duì)即刻早期基因c-fos和c-jun mRNA及其蛋白表達(dá)的影響，并對(duì)二者的目的基因GAP-43、bFGF和NGF的表達(dá)進(jìn)行了研究，最后從多個(gè)方面對(duì)脊髓恢復(fù)的情況進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：IN-1和NT-3抑制c-fos及其蛋白的表達(dá)，促進(jìn)c-jun及其蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)了其目的基因GAP-43、bFGF和NGF的