人體正常皮膚及病理性瘢痕中神經(jīng)生長因子及其前體的表達.pdf

1、背景:病理性瘢痕廣泛形成于手術(shù)、外傷以及燒傷后，主要包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩。與正常皮膚相比，病理性瘢痕表現(xiàn)為以成纖維細胞為主的細胞增殖、活性增強，產(chǎn)生大量膠原蛋白，引起Ⅰ/Ⅲ型膠原在組織中大量沉積。研究發(fā)現(xiàn)，作為神經(jīng)營養(yǎng)素家族中的一員，神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）能夠促進瘢痕成纖維細胞增殖，而NGF在體內(nèi)首先以前體(nerve growth factorprecursor，proNGF)的形式合成，近

2、年來人們逐漸認(rèn)識到proNGF是一種重要的凋亡因子，其廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)以及非神經(jīng)系統(tǒng)的組織及細胞中。為了解NGF以及proNGF是否與瘢痕增生有關(guān)，本研究通過免疫組化及蛋白免疫印跡等方法觀察對比NGF、proNGF在病理性瘢痕及正常皮膚中的表達情況。
　　目的:觀察神經(jīng)生長因子(NGF)及其前體(proNGF)在病理性瘢痕中的表達，初步探討其在病理性瘢痕發(fā)生過程中的作用及意義。
　　方法:選擇2011年12月至2013年5

3、月山東省立醫(yī)院燒傷整形科的手術(shù)患者，分為三組，增生性瘢痕23例和瘢痕疙瘩20例作為病理性瘢痕組，正常皮膚20例作為對照組。4μm連續(xù)切片后，進行HE常規(guī)染色，在光鏡下觀察三種組織的組織形態(tài)學(xué)差別;應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測NGF、proNGF在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮膚中的表達和分布;蛋白免疫印跡(westernblot)檢測三種組織中NGF、proNGF蛋白表達量的差異，利用圖像分析技術(shù)對條帶進行灰度分析。
　　結(jié)果:HE

4、染色光鏡下正常皮膚、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的組織表現(xiàn):正常皮膚中不同部位的表皮厚度差異較大，但分層均較為清晰，角質(zhì)層厚;真皮層中真皮乳頭突出明顯，乳突數(shù)目較多，網(wǎng)織層中可見成纖維細胞，數(shù)目較少，核小深染;同時正常皮膚組織中可見毛囊、皮脂腺、汗腺等皮膚附屬器。增生性瘢痕中表皮基底層和棘層較厚，細胞排列疏松，組織排列紊亂，部分可有真皮組織嵌入;真皮乳頭較少且低矮、變平，網(wǎng)織層厚，可見膠原纖維大量增生，部分玻璃樣變性，內(nèi)有多量成纖維細胞，細胞體

5、積較大，胞漿豐富;鮮見皮膚附屬器存在。瘢痕疙瘩表皮層萎縮，細胞較少且排列疏松，可有真皮組織嵌入;真皮乳頭較少，網(wǎng)織層厚且致密，膠原粗大，部分可形成膠原結(jié)節(jié)，成纖維細胞數(shù)量大，體積大，胞漿豐富。
　　NGF在正常皮膚、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表達:NGF表達于表皮及真皮層，在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中，表皮的基底層和真皮層中成纖維細胞聚集處可見較多陽性顆粒，正常皮膚中陽性表達多位于表皮基底層和皮膚附屬器周圍，免疫組化結(jié)果顯示增生性瘢痕和

6、瘢痕疙瘩中NGF的表達明顯高于正常皮膚(t=27.54，P＜0.01;t=26.82，P＜0.01)，Westernblot半定量分析NGF的蛋白含量，結(jié)果顯示增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中NGF蛋白的含量明顯高于正常皮膚組織（t=16.22,P＜0.01;t=15.19,P＜0.01）。
　　ProNGF在正常皮膚、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表達:proNGF在正常皮膚、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表達均呈陽性，表達位于三種組織的表皮和成纖維

7、細胞，免疫組化結(jié)果顯示正常皮膚組織中proNGF的表達高于增生性瘢痕(x2=8.23，P＜0.05)和瘢痕疙瘩（x2=8.29，P＜0.05），Westernblot半定量分析proNGF的蛋白含量，結(jié)果顯示正常皮膚組織中proNGF的蛋白表達量高于增生性瘢痕（t=14.02，P＜0.01）和瘢痕疙瘩（t=20.80，P＜0.01）。
　　結(jié)論:NGF、proNGF均表達于正常皮膚、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，其表達位于表皮層和真皮層，