毛細管柱氣相色譜法測定桑葉中1-脫氧野尼霉素含量的研究.pdf

1、1-脫氧野尼霉素(1-deoxynojirimycin)是桑葉中的一種哌啶生物堿，其化學名稱是3,4,5.三羥基-2-羥甲基四氫吡啶，分子式為C6H13NO4，分子量為163。DNJ作為α-葡萄糖苷酶的抑制劑，具有降血糖、抗病毒、抗腫瘤轉(zhuǎn)移等作用。另外，DNJ還是α-葡萄糖淀粉酶的有效抑止劑。 本試驗利用DNJ與糖類的相似性，按照常用的用氣相色譜法測定糖類物質(zhì)進行的衍生化方式，將DNJ的羥基進行乙?；磻?yīng)，探索用毛細管柱氣相色譜

2、法測定桑葉中DNJ的含量，并比較了陜西省蠶桑絲綢研究所品種桑園中種植的110個桑品種不同時期采集葉片中DNJ含量的高低。結(jié)果表明，用毛細管柱氣相色譜法測定桑葉中的DNJ含量是可取的，不同品種不同采集時間的桑葉樣品中DNJ的含量有一定差別。 本實驗考察了不同溶劑和不同提取方式對桑葉中DNJ提取的影響，選用甲醇、蒸餾水、吡啶等不同試劑對DNJ進行提取，提取方式分別嘗試了震蕩、加熱、超聲提取。最終確定用吡啶作為提取試劑在超聲波條件下處

3、理30分鐘為毛細管氣相色譜法測定DNJ的最佳提取條件。同時考察了衍生化條件對該試驗的影響，考察內(nèi)容包括衍生化試劑、衍生化時間、衍生化溫度等內(nèi)容。最終確定在用醋酸苷作為乙?；噭?，鹽酸羥胺作為催化劑，在水浴90℃條件下乙?；?0分鐘為最佳衍生化條件。 本試驗還考察了不同色譜條件對DNJ測定的影響，考察內(nèi)容包括色譜柱選擇、柱溫、載氣流量進樣方式等。最終確定色譜條件為：色譜柱OV-1701，初溫285℃×5min，以10℃/min上升

4、至295℃，維持25min，以20℃/min下降至285℃；氣化室溫度310℃；檢測口溫度310℃；氫氣流量47mL/min；進樣量1μL，火焰離子檢測器(FID)，色譜分析軟件采用GCsolution島津氣相色譜工作站。 本試驗采用標準曲線法計算DNJ含量，該法具有簡化重復(fù)操作，避免系統(tǒng)誤差等優(yōu)點。試驗及計算后得到標準曲線方程y=36435x+17225,R2=0.9921。最低檢測濃度為0.01μg/mL。加樣回收率試驗結(jié)果

5、平均回收率為96.11％，RSD=3.24％(n=5)。重復(fù)性試驗結(jié)果RSD=2.10％(n=5)。穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明：標樣及樣品在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD分別為1.00％和2.56％(n=5)。 用所建立的毛細管柱氣相色譜法對陜西省蠶桑絲綢研究所品種桑園中110個桑品種桑葉中DNJ含量進行了測定。并比較了不同品種在霜前和霜后DNJ含量的高低，結(jié)果顯示，110種桑葉中均含有DNJ。其9月底(霜前)含量在0.059％～0.535