保護(hù)性通氣策略對急性肺損傷大鼠肺泡上皮緊密連接影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察急性肺損傷(ALI)后不同時間對肺泡上皮緊密連接(可)完整性的破壞及其對肺泡上皮通透性改變的影響。 方法:內(nèi)毒素(LPS)靜脈注射復(fù)制大鼠ALI模型。25只清潔級SD大鼠隨機(jī)分成5組：對照組，LPS組，LPS+機(jī)械通氣2小時(LV2h)組，LPS+機(jī)械通氣4小時(LV4h)組和LPS+機(jī)械通氣6小時(LV6h)組。動物處死前2h靜脈注射異硫氰酸熒光素標(biāo)記的白蛋白(FITC-Albumin)，處死后肺泡灌洗，根據(jù)肺泡和血

2、清中標(biāo)記白蛋白的比值，即A肺泡/A<,血清>測定肺泡上皮通透性，取肺組織作病理檢查，光鏡下行AUI半定量評分；測定肺組織濕/干重比(W/D)反映肺水腫程度；免疫熒光共聚焦觀察肺組織可的形態(tài)學(xué)改變以及TJ蛋白Occludin的表達(dá)；Western Blot測定Occludin的表達(dá)。 結(jié)果:(1)對照組ALI評分2.604±0.25，LPS組(8.004±0.21)顯著增高(q=25.74，P<0.05)；與LV2h組(8.02

3、±0.48)相比，LV4h組(7.20±0.40)和 LV6h組(7.06±0.23)顯著降低(q=3.91和q=4.58，P<0.05)。(2)對照組W/D 1.97±0.75，LPS組(5.81±0.68)顯著下降(q=10.12，P<0.05)i與LV2h組相(4.204±0.53)比，LV4h組(3.68±0.65)和LV6h組(3.61±0.28)差異無顯著性(P>0.05)。(3)對照組A<,肺泡>/A<,血清>1.09+0

4、.05，LPS組(1.994±0.23)顯著增高(q=3.33，P<0.05)；與LV2h組(3.584±0.47)相比，LV4h組(1.874±0.57)和LV6h組(2.04±0.57)的顯著降低(q=6.31和q=5.67，P<0.05)。(4)對照組動物肺組織清晰可見TJ沿肺泡上皮連續(xù)排列，熒光密度強(qiáng)，LPS干預(yù)各組TJ排列不規(guī)則，斷斷續(xù)續(xù)，呈彌散分布，且熒光密度明顯下降，LV2h組猶為明顯。(5)免疫熒光測定對照組的Occlu

5、din的表達(dá)69.2±9.9，LPS組(45.44±6.3)顯著降低(q=6.39，P<0.05)；與LV2h組(18.0±3.3)相比，LV4h組(30.8±4.2)和LV6h組(29.2±2.6)顯著增加(q=3.44和q=3.01，P<0,05)。Western blot測定對照組Occludin的表達(dá)0.90±0.42，LPS組(0.694-0.57)顯著下降(q=4.29，P<0.05):與LV2h組(0.27 ±0.69)相

6、比，LV4h組(0.44±0.83)和LV6h組(0.43±0.12)則顯著升高(q=3.44和q=3.40，P<0.05)。 結(jié)論:ALI后機(jī)械通氣2h，肺泡上皮可的破壞最為嚴(yán)重，肺泡上皮通透性也最高。 二潮氣量對正常及急性肺損傷大鼠肺泡上皮緊密連接的影響目的探討潮氣量對急性肺損傷(ALI)及正常大鼠肺泡上皮緊密連接(TJ)的影響。方法內(nèi)毒素(LPS)靜脈注射復(fù)制大鼠AU模型。30只清潔級SD大鼠隨機(jī)分成6組：對照組

7、，LPS組，小潮氣量機(jī)械通氣(Lv，6ml/kg)組，LPS±小潮氣量機(jī)械通氣(LLV，6ml/kg)組，常規(guī)潮氣量機(jī)械通氣(NV，12ml/kg)組以及LPS±常規(guī)潮氣量機(jī)械通氣(LNV，12ml/kg)組。動物處死前2h靜脈注射異硫氰酸熒光素標(biāo)記的白蛋白(FITC-Albumin)，處死后肺泡灌洗，通過肺泡和血清中標(biāo)記白蛋白的比值即A<,肺抱>/A<,血><,清>反映肺泡上皮通透性，取肺組織作病理檢查，光鏡下行ALI半定量評分；測定

8、肺組織濕/干重比(W/D)反映肺水腫程度；免疫熒光共聚焦顯微鏡和電子顯微鏡觀察肺組織可的形態(tài)學(xué)改變；免疫熒光、Western Blot及免疫組化測定可蛋白Occludin的表達(dá)。 結(jié)果:(1)對照組動物ALI評分2.60±0.25，LV組(4.44±0.26)、NV組(5.94±0.45)和LPS組(8.00±0.21)顯著增高(q=7.10，q=12.59和q=24.28，P<0.05)；NV組顯著高于LV組(q=15.92

9、，P<0.05)；LNV組(8.94±0.36)顯著高于LLV組(8.02±0.48，q=4.23，P<0.05)。(2)對照組動物W/D 2.0±O.7，LV組(3.4±0.8)、NV組(4.3±0.9)和LPS組(5.8±0.7)顯著增高(q=3.32，q=5.31和q=8.69，P<0.05)；LV組與NV組無顯著差異(P>0.05)；LLV組(4.2±0.5)顯著低于LNV組(6.0±0.5，q=3.96，P<0.05)。(3)

10、對照組動物A肺泡/A血清1.09±0.05，NV組(1.86±0.13)和LPS組(1.99±0.23)顯著增高(q=3.74和q=4.35，P<0.05)；LV組與NV組無顯著差異(P>0.05)；LLV組(3.58±0.47)顯著低于LNV組(4.52±0.13，q=4.55，P<0.05)。(4)共聚焦顯微鏡觀察對照組動物TJ連續(xù)整齊排列，光密度強(qiáng)，機(jī)械通氣和/或LPS處理各組TJ結(jié)構(gòu)不完整，尤其以LNV組為甚；電鏡觀察對照組動物

11、胞膜間豐富的結(jié)構(gòu)清晰較長連續(xù)性帶狀可，電子密度較高，機(jī)械通氣和/或LPS處理各組的TJ形態(tài)結(jié)構(gòu)不完整，尤其以LNV組為甚。(5)免疫熒光測定對照組動物Occludin表達(dá)69.2±9.9，LV組(40.6±3.0)、NV組(26.2±5.1)和LPS組(45.4±6.3)顯著減少(q=8.00，q=12.19和q=6.75，P<0.05)：LV組顯著高于NV組(q=4.08，P<0.05)；LLV組(18.0±3.3)顯著高于LNV組(

12、7.0±1.6，q=10.89，P<0.05)；Westernblot測定對照組動物Occludin的表達(dá)0.90±0.04，LV組(0.58±0.05)、NV組(0.48±0.07)和LPS組(0.69±0.06)顯著下降(q=8.77，q=11.76和q=5.92，P<0.05)；LV組與NV組無顯著差異(P>0.05)；LLV組(0.27±0.69)顯著高于LNV組(0.15±0.04，q=3.24，P<0.05)；免疫組化測定對

13、照組動物Occludin的表達(dá)85.0±5.1，LV組(69.0±2.5)、NV組(36.0±3.0)和LPS組(51.8±8.5)顯著下降(q=4.43，q=13.57，q=9.19，q=11.41和q=18.06，P<0.05)；LV組顯著高于NV組(q=9.14，P<0.05)；LNV N(19.8±6.9)顯著高于LLV組(43.8±4.8，q=6.65，P<0.05)。 結(jié)論:小潮氣量機(jī)械通氣可減輕肺泡上皮可的破壞，改