TSC2在人肝癌HepG2細(xì)胞中的表達(dá)及機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：觀察TSC2基因在人肝癌HepG2細(xì)胞中的表達(dá)，并對影響其表達(dá)的機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：1、不同工作濃度（0、0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L和102.4μmol/L）5-Aza-CdR作用HepG2細(xì)胞，應(yīng)用MTT法測不同時間（24、48、72h）細(xì)胞的增殖抑制率；
　　2、應(yīng)用RT-PCR和Western blotting測5-Aza-CdR作用于HepG2細(xì)胞

2、后的TSC2mRNA和tuberin蛋白的表達(dá)；
　　3、甲基化特異性PCR分別檢測未經(jīng)5-Aza-CdR處理和經(jīng)用5-Aza-CdR處理的兩組肝癌細(xì)胞HepG2中TSC2基因組啟動子甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果:1、MTT法測得：5-Aza-CdR可明顯抑制人肝癌細(xì)胞HepG2增殖，在終濃度為0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L和102.4μmol/L的5-Aza-CdR作用人肝癌He

3、pG2細(xì)胞72小時后，抑制率分別為(40.14±2.11)％、(48.72±3.21)%、(56.66±2.43)%、(62.24±2.43)%和(70.10±3.12)%；終濃度為102.4μmol/L的5-Aza-CdR作用人肝癌HepG2細(xì)胞24、48、72小時后抑制率分別為（62.90±2.14）%、（67.52±2.05）%和（70.10±3.12）%；呈現(xiàn)時間及劑量依賴性（P<0.05）；
　　2、不同濃度5-Aza-

4、CdR作用于 HepG2細(xì)胞培養(yǎng)72小時后發(fā)現(xiàn)，隨著濃度的增加 TSC2mRNA的表達(dá)增加(P<0.05), tuberin的表達(dá)亦增加（P<0.05）；
　　3、MSP法測得未經(jīng)5-Aza-CdR處理的肝癌細(xì)胞HepG2中TSC2基因甲基化與非甲基化共存，并且甲基化程度明顯高于非甲基化；加用去甲基化藥物5-Aza-CdR組甲基化程度明顯下降；
　　結(jié)論：TSC2作為一種抑癌基因，在 HepG2細(xì)胞中表達(dá)下降，其機(jī)制可能是T