環(huán)境高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)環(huán)境樣品污染物去甲基化表觀遺傳毒性研究.pdf

1、目的:對(duì)化學(xué)物去甲基化表觀遺傳毒性QDMP評(píng)價(jià)方法進(jìn)行性能測(cè)試,應(yīng)用此方法定量評(píng)價(jià)某環(huán)境高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)環(huán)境樣品的去甲化表觀遺傳毒性,并探索影響環(huán)境樣品表觀遺傳毒性大小的主要成分。
　　方法:將pEGFP-C3質(zhì)粒人工甲基化處理,處理后的C3質(zhì)粒熒光蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)處于高甲基化狀態(tài),隨后將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)人類HepG-2肝癌細(xì)胞株,以需檢測(cè)污染物為受試物與改造后的細(xì)胞株(EGFP-HepG2)共培養(yǎng),依據(jù)細(xì)胞綠色熒光強(qiáng)度來定量檢測(cè)和評(píng)價(jià)污染物

2、的去甲基化表觀遺傳毒性的強(qiáng)弱(簡(jiǎn)稱QDMP方法),對(duì)QDMP方法的靈敏性和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試,并依據(jù)此方法,選取某環(huán)境高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)的地表水、地下水、土壤和底泥樣品為代表性的環(huán)境樣品,應(yīng)用QDMP方法檢測(cè)和評(píng)價(jià)其去甲基化表觀遺傳毒性,并對(duì)環(huán)境樣品污染物提取液的主要成分進(jìn)行掃描檢測(cè)分析。
　　結(jié)果:QDMP方法性能測(cè)試結(jié)果顯示,該方法的評(píng)價(jià)靈敏度為0.00004μM;對(duì)濃度范圍介于0.00016,0.0008,0.004,0.02,0.1μM

3、之間的5-Aza-CdR樣品進(jìn)行測(cè)試,發(fā)現(xiàn)同一樣品5個(gè)平行樣品之間的熒光檢測(cè)變異程度介于7.5~23.9％之間,顯示出該方法具有一定的穩(wěn)定性。環(huán)境樣品檢測(cè)結(jié)果顯示,在9個(gè)測(cè)試樣(2個(gè)地表水、3個(gè)地下水、2個(gè)土壤、2個(gè)底泥)中,有7個(gè)樣品去甲基化能力較強(qiáng),占總個(gè)測(cè)試樣品的78%,其去甲基化表觀遺傳毒性介于0.065-0.257μM的5-AZA-CdR當(dāng)量之間。一個(gè)底泥樣品提取液毒性最高,毒性當(dāng)量為0.257μM;重金屬檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其中的Cd的

4、濃度為1.62mg/Kg,超過土壤中的標(biāo)準(zhǔn)限值1.00mg/Kg;一個(gè)地下水樣品的毒性較高,毒性當(dāng)量為0.142μM;重金屬檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其中的Mn的濃度為4868.87ug/L,超過土壤中的標(biāo)準(zhǔn)限值300ug/L。四個(gè)土壤或底泥樣品中,三個(gè)樣品的去甲基化能力較強(qiáng),重金屬檢測(cè)發(fā)現(xiàn)四個(gè)樣品的重金屬均超標(biāo),環(huán)境樣品表觀遺傳毒性檢測(cè)結(jié)果與環(huán)境分析結(jié)果具有基本一致的趨勢(shì)。
　　結(jié)論:QDMP方法具有良好的靈敏性和穩(wěn)定性;部分環(huán)境樣品的去甲基化表