猴頭菌屬不同菌種發(fā)酵產(chǎn)物的比較研究.pdf

1、猴頭菌是一種珍貴的藥食兼用菌，其有效成分多糖類物質(zhì)被廣泛應(yīng)用于消化道潰瘍、抗腫瘤等藥物的研發(fā)，并取得了很好的臨床效果。但是，對猴頭菌液體發(fā)酵培養(yǎng)時菌體代謝規(guī)律的研究還有待進(jìn)一步深入。目前，國內(nèi)外有關(guān)猴頭菌屬不同菌種間差異的研究尚未見報道，且真菌中同屬不同種間代謝產(chǎn)物的區(qū)別也鮮見報道。所以，本研究從實(shí)驗(yàn)室的液體搖瓶培養(yǎng)和工廠化的液體深層發(fā)酵兩方面，比較猴頭菌屬兩不同菌種在相同培養(yǎng)條件下胞外代謝產(chǎn)物的差異，為保護(hù)吉林省菌物藥物原料提供理論依

2、據(jù)。本研究分為三個部分： 第一部分，采用生物學(xué)和分子生物學(xué)方法對小刺猴頭菌與猴頭菌的菌絲體進(jìn)行了比較研究。經(jīng)拮抗實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵菌絲形態(tài)觀察、子實(shí)體復(fù)原形態(tài)及RAMP分子標(biāo)記的研究，結(jié)果證明兩菌種為猴頭菌屬不同菌種。 第二部分，在相同液體搖瓶培養(yǎng)條件下，將兩菌種在玉米漿培養(yǎng)基和紅糖培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)一個月。培養(yǎng)期間，每兩天對發(fā)酵液進(jìn)行取樣。采用苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水楊酸比色法測定不同樣品中總糖、還原糖的含量；采用考馬斯亮

3、藍(lán)法測定發(fā)酵液中蛋白質(zhì)含量的變化；并采用紫外光譜掃描和熒光光譜掃描全面檢測胞外代謝產(chǎn)物的動態(tài)變化。結(jié)果表明：兩菌種在相同培養(yǎng)基培養(yǎng)和相同菌種在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)，糖和蛋白質(zhì)等代謝產(chǎn)物的變化趨勢有一定差異。紅糖液體培養(yǎng)基有利于多糖的產(chǎn)生，玉米漿液體培養(yǎng)基有利于小分子類物質(zhì)的生成。 第三部分，在相同的條件下對小刺猴頭菌和猴頭菌進(jìn)行工廠化液體深層發(fā)酵。然后對胞外藥效活性成分-多糖采用相同的分離、純化方法，即用80℃水提、三倍95％乙醇沉

4、淀多糖，用Sevag法除去游離蛋白質(zhì)，用透析的方法除去小分子雜質(zhì)，用乙醇分級沉淀，DEAE-32纖維素柱層析分級，除去部分色素、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，用Sepharose CL-6B凝膠柱層析分別分離出胞外均一組分的多糖。經(jīng)醋酸纖維素薄膜電泳、Sepharose CL-6B凝膠柱層析等檢測，證明了小刺猴頭菌種多糖(HCP)與猴頭菌種多糖(HEP)都為均一組分多糖，其分子量分別為：HCP46386，HEP26671。再對兩菌種的均一組分多糖分別進(jìn)