豬DGAT基因的克隆、SNP檢測及與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、在動物遺傳育種過程中，隨著分子遺傳學、數(shù)量遺傳學和分子生物學技術(shù)的發(fā)展出現(xiàn)了分子標記輔助選擇和滲入等分子育種技術(shù)，并得到廣泛應用，分子育種技術(shù)與常規(guī)育種方法相結(jié)合極大地加速了豬遺傳改良的進程。分子標記輔助選擇的基礎(chǔ)是尋找與重要經(jīng)濟性狀相關(guān)的主效基因或分子標記。脂肪組織不僅是動物體的能量儲存庫，而且還是體內(nèi)最大的內(nèi)分泌器官，另外，與脂肪相關(guān)的性狀是豬胴體和肉質(zhì)品質(zhì)的重要經(jīng)濟性狀。因此本研究選取2個與脂肪代謝相關(guān)的基因——二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶

2、1和二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶2作為豬經(jīng)濟性狀候選基因進行了研究。獲得的研究結(jié)果如下：
　　 1.利用基因組PCR步移法從豬的基因組中擴增出了二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶1(diacylglycerol acyltransferase1，DGAT1)基因5'側(cè)翼2556bp的序列。利用NNPP、MethPrimer、TFSEARCH等生物信息學軟件對豬DGAT1基因的核心啟動子、轉(zhuǎn)錄起始位點、CpG島的分布以及與啟動子相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子進行了預測和

3、分析。
　　 2.采用5'端缺失策略，結(jié)合基因啟動子預測結(jié)果，以pGL3-Basic Vector為載體構(gòu)建了16個DGAT1基因啟動子區(qū)重組質(zhì)粒。
　　 3.應用RT-PCR的方法，克隆了梅山豬和大白豬二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶2(diacylglycerol acyltransferase2，DGAT2)基因包括整個編碼序列的cDNA片段1481bp(GenBank登錄號為EU684958)，ORF為1086bp，編碼361

4、個氨基酸；利用DNAStar、CLUSTAL W、Signal P3.0、Prosite等軟件對該基因的結(jié)構(gòu)、所編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能等特征進行了預測和分析，并構(gòu)建了分子系統(tǒng)進化樹；克隆了該基因第三、五、六內(nèi)含子，內(nèi)含子剪接位點序列均符合GT/AG規(guī)則。
　　 4.通過組織表達譜分析發(fā)現(xiàn)DGAT1基因在各個組織均有表達；通過Real-timeRT-PCR組織表達譜分析，發(fā)現(xiàn)DGAT2基因在脂肪、肝臟組織中高表達，其中在脂肪組織表達

5、量最高，在其它組織的表達量很低；選取與三酰甘油代謝關(guān)系密切的三個組織——脂肪、肝臟和小腸，比較了梅山豬與大白豬DGAT2基因在這些組織中的表達差異，結(jié)果表明梅山豬該基因在這些組織的表達量均顯著高于在大白豬上的表達量。
　　 5.分析了DGAT1啟動子區(qū)和DGAT2編碼區(qū)及內(nèi)含子的序列在不同豬群中的多態(tài)性。結(jié)果如下：(1)在DGAT1基因啟動子區(qū)共發(fā)現(xiàn)4處轉(zhuǎn)換突變，其中距翻譯起始密碼子ATG378bp處-C→T轉(zhuǎn)換引起PvuⅡ酶切

6、位點的改變；(2)在所獲得的DGAT2基因的序列中共發(fā)現(xiàn)7處突變，顛換突變2個，轉(zhuǎn)換突變5個，其中第七外顯子43bp處-G→A轉(zhuǎn)換導致BssNAⅠ酶切位點改變。
　　 6.對DGAT1和DGAT2基因共2個多態(tài)性位點在不同豬群中進行了基因分型，結(jié)果表明這些位點在這些豬群中具有豐富的多態(tài)性，并在432頭大白×梅山F2代資源家系中與重要生產(chǎn)性狀進行了關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果表明：(1)豬DGAT1 PvuⅡ-RFLP基因型不同時，瘦肉率、胸腰