稻水象甲腸道共生細(xì)菌的分離、轉(zhuǎn)化及定殖能力研究.pdf

1、共生細(xì)菌在昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖、抵抗病原菌和解毒有害物質(zhì)等生物學(xué)過(guò)程中起重要作用。稻水象甲（Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel）在我國(guó)是一種重要的外來(lái)入侵害蟲(chóng)，具有蔓延快、危害重、難防治的特點(diǎn)。此前有關(guān)稻水象甲體內(nèi)共生細(xì)菌的研究表明，其腸道細(xì)菌群落的多樣性較低，Pantoea和Wolbachia是主要種類。本研究基于體外培養(yǎng)和細(xì)菌16S rRNA序列的擴(kuò)增和分析，對(duì)稻水象甲3個(gè)地理種群成蟲(chóng)腸道中的細(xì)菌進(jìn)行

2、了分離和鑒定，將pZeoDsRed質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到細(xì)菌中，并初步研究了轉(zhuǎn)化株在稻水象甲成蟲(chóng)腸道內(nèi)的定殖情況。結(jié)果如下:
　　對(duì)山西原平、云南尋甸和湖南湘鄉(xiāng)3個(gè)不同地理種群的稻水象甲的腸道細(xì)菌進(jìn)行分離，鑒定出同屬于芽孢桿菌綱的兩種細(xì)菌即蠟樣芽胞桿菌Bacillus cereus和路德維希腸桿菌Enterobacter ludwigii。其中，B.cereus已被發(fā)現(xiàn)存在于多種昆蟲(chóng)的腸道中，在稻水象甲中為首次分離到;E.ludwigii則至

3、今尚未在昆蟲(chóng)中有過(guò)類似報(bào)道。
　　對(duì)分離到的B.cereus和E.ludwigii及此前分離到的稻水象甲另一種腸道細(xì)菌糞腸球菌Enterococcus faecalis進(jìn)行了擬轉(zhuǎn)化，成功地將pZeoDsRed質(zhì)粒轉(zhuǎn)入這3種細(xì)菌中，獲得了具有抗氨芐青霉素和博萊霉素能力的重組細(xì)菌。此結(jié)果說(shuō)明稻水象甲腸道中的一些細(xì)菌能被成功轉(zhuǎn)化，具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。
　　令稻水象甲成蟲(chóng)分別取食經(jīng)上述3種細(xì)菌轉(zhuǎn)化株涂抹處理過(guò)的水稻葉片，觀察了轉(zhuǎn)化