?；悄懰釋π∈竺庖呒毎δ艿恼{節(jié)作用研究.pdf

1、本文旨在通過觀察TCA對小鼠巨噬細胞和T、B淋巴細胞的影響，探討TCAX寸機體免疫細胞功能的調節(jié)作用及其作用機理。其主要內容包括: 為了闡明TCA對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響，本研究分別采用雞紅細胞半體內法和體外培養(yǎng)的腹腔巨噬細胞吞噬中性紅法測定了TCA對體內、外小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響，結果證明，高、低劑量的TCA均能極顯著的提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞百分率(p<0.01)，顯著提高小鼠腹腔巨噬細胞的雞紅細胞吞噬指

2、數(shù)，0.015、0.3、1.5和15μg/mL的TCA均能顯著提高體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞對中性紅的吞噬率(P<0.05)，表明TCA具有提高巨噬細胞吞噬功能的作用。采用ELISA法測定了TCA對小鼠巨噬細胞分泌白介素-1β的影響，試驗結果表明，高、低劑量的TCA均能極顯著提高正常和免疫抑制小鼠血清中的含量(P<0.01)，1.5和15μg/mL的TCA可顯著提高體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞ⅠL-1β的分泌量(P<0.01)，0.015和1

3、.5μg/mL的TCA可極顯著提高LPS活化的小鼠腹腔巨噬細胞IL-1β的分泌量P<0.01)，0.3和15μg/mL的TCA可顯著提高LPS活化的小鼠腹腔巨噬細胞IL-1β的分泌量(P<0.05)，表明TCA具有促進腹腔巨噬細胞的分泌ⅠL-1β的功能。采用ELISA法，檢測了TCA對正常和免疫抑制模型小鼠血清中TNF-α含量的影響，結果證明，TCA能夠極顯著的提高正常小鼠和免疫抑制小鼠血清中TNF-α的含量(P<0.01)，表明TCA

4、具有刺激巨噬細胞分泌TNF-α功能。采用MTT法檢測了TCA對正常的腹腔巨噬細胞和適量LPS和CsA刺激的腹腔巨噬細胞增殖反應的影響，試驗結果表明，0.15、0.3、3和15μg/ml的TCA可極顯著提商小鼠腹腔巨噬細胞增殖活性P<0.01)，且其作用峰期在用藥后的12h；0.3μg/mL的TCA可顯著增強LPS刺激的腹腔巨噬細胞的增殖反應(P<0.05)，0.015、0.3、1.5和15μg/ml的TCA對CsA抑制的腹腔巨噬細胞的增

5、殖反應有顯著的恢復作用(p<0.05)，表明TCA具有刺激巨噬細胞增殖分化的作用。 為了闡明TCA對B、T淋巴細胞功能的調節(jié)作用及其作用機理，本研究采用MTI法檢測了TCA對正常和適量LPS、ConA及CsA刺激的體外培養(yǎng)的小鼠脾淋巴細胞增殖反應的影響，試驗結果表明，隨TCA濃度的逐漸增大，小鼠脾淋巴細胞的增殖活性逐漸增強，且其作用峰期在加藥后24h，15μg/mL的TCA可顯著提高體外培養(yǎng)的小鼠脾淋巴細胞的增殖活性(P<0.0

6、5)，可極顯著提高LPS刺激活化的小鼠脾淋巴細胞的增殖活性(P<0.01)，可極顯著提高CsA抑制的脾淋巴細胞的增殖活性(P<0.01)，表明TCA具有增強小鼠脾淋巴細胞的增殖活性的功能。采用流式細胞術雙抗標記法檢測TCA對正常和免疫抑制模型小鼠外周血和脾臟中T、B淋巴細胞及其亞群的影響，試驗結果表明，高、低劑量的TCA均可極顯著地提高小鼠外周血CD3+細胞、CD4+細胞、細胞百分率及CD4+/CD8+的比值(P<0.01)，低劑量的T

7、CA可極顯著地提高外周血和脾臟CD19+細胞百分率(P<0.01)，高劑量TCA能夠極顯著恢復被CsA抑制的小鼠外周血和脾臟CD3+細胞百分率(P<0.01)，而低劑量的TCA則極顯著地恢復被CsA抑制的小鼠外周血和脾臟CD19+細胞百分率(P<0.01)，高、低劑量的TCA都能極顯著地提高被CsA抑制的小鼠外周血CD4+和CD8+細胞百分率及CD4+/CD8+的比值(P<0.01)高、低劑量的TCA均能極顯著提高小鼠脾臟CD3+細胞的

8、百分率(P<0.01)，表明TCA作用于機體后可引起輔助性T細胞和誘導性T細胞的增多，抑制性T細胞減少，從而增強機體的細胞免疫應答反應，增加B淋巴細胞的百分率，從而增強機體的體液免疫應答反應。采用ELISA法測定了健康小鼠和免疫抑制小鼠血清中以及體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細胞上清液中IgG的含量，試驗結果表明，TCA可顯著提高健康小鼠血清中IgG的含量(P<0.05)，顯著提高體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細胞IgG的分泌量(P<0.05)，顯著恢復被Cs

9、A抑制的小鼠脾淋巴細胞的IgG分泌量(P<0.05)，顯著增強被LPS刺激的脾淋巴細胞IgG分泌量(P<0.05)，表明TCA具有刺激B淋巴細胞分泌IgG作用；采用實時熒光定量RT-PCR方法檢測了正常和免疫抑制模型小鼠脾臟IL-2基因的相對表達量以及體外培養(yǎng)的正常和適量LPS和ConA刺激的小鼠脾淋巴細胞IL-2基因的相對表達量，并采用ELISA方法檢測了TCA對正常和適量LPS、ConA及CsA刺激的脾淋巴細胞分泌IL-2的影響，試

10、驗結果表明，低劑量TCA可極顯著的提高免疫抑制小鼠脾臟IL-2 mRNA的表達(P<0.01)，但對小鼠體外培養(yǎng)的脾淋巴細胞IL-2基因的表達卻表現(xiàn)為極顯著降低作用(p<0.01)，不同濃度TCA均有促進體外培養(yǎng)的脾淋巴細胞分泌IL-2蛋白的作用，并呈現(xiàn)劑量依賴關系，而且TCA可顯著提高LPS、ConA活化的脾淋巴細胞IL-2分泌量(P<0.05)，顯著提高被CsA抑制的脾淋巴細胞IL-2分泌量(P<0.05)。 結論:TCA對