卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中抑癌基因NPRL2、PKIP和THY1表達(dá)的臨床意義.pdf

1、目的:卵巢癌(ovariancancer)的死亡率居?jì)D科腫瘤之首，原因是未能找到有效的早期診斷技術(shù)，且沒有有效的治療方案。根據(jù)卵巢癌的二元論發(fā)病模型和卵巢外起源學(xué)說，將上皮性卵巢癌分為2種完全不同的類型Ⅰ型和Ⅱ型，通過兩型卵巢癌的病理形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特征發(fā)現(xiàn)，Ⅰ型卵巢癌一般是通過良性腫瘤→交界性（非典型）腫瘤→低度惡性腫瘤的發(fā)病過程，而Ⅱ型卵巢癌可能是由輸卵管傘端已惡變細(xì)胞直接脫落至卵巢上皮所致。Ⅰ型卵巢癌起病緩慢，常有前驅(qū)癥狀，多為臨床

2、早期，預(yù)后較好，但對(duì)化療不敏感，容易產(chǎn)生耐藥，但其易早期發(fā)現(xiàn)，應(yīng)以手術(shù)切除為主，對(duì)Ⅰ型卵巢癌而言，分子通路的靶向藥物可能成為有效的輔助治療手段。Ⅱ型卵巢癌發(fā)病快，無(wú)前驅(qū)癥狀，侵襲性強(qiáng)，多為臨床晚期，預(yù)后不良，但對(duì)化療敏感，晚期病例多，以腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和聯(lián)合化療為主。其中卵巢漿液性腺癌（ovarianserouscarcinoma,OSC）是卵巢癌中最常見的組織學(xué)類型，且是最能夠很好的應(yīng)用二元論模型的組織學(xué)類型。Singer等提出卵巢低級(jí)

3、別漿液性腺癌通過良性-交界性-惡性的發(fā)病過程發(fā)展形成，而卵巢高級(jí)別漿液性腺癌是從漿液性輸卵管上皮內(nèi)癌直接發(fā)展而來(lái)。而有關(guān)其發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制仍未完全闡明。卵巢漿液性癌的發(fā)生是一種多因素、多步驟復(fù)雜的生物學(xué)過程。腫瘤抑癌基因NPRL2通過與3-磷酸肌醇依賴蛋白激酶Ⅰ(PDK1)結(jié)合形成NPRL2/PDK1復(fù)合物，抑制PDK1活化，此外該復(fù)合物還使PDK1下游的核糖體蛋白激酶Akt和P70失活，從而提高了腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性，尤其是鉑

4、類。RKIP(Rafkinaseinhibitorprote)可以特異性的抑制Raf-1的活性，研究表明RKIP的表達(dá)缺失也使腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類敏感性下降，并致腫瘤細(xì)胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移。THY1(Thymuscellantigen1)是一種高度糖基化的細(xì)胞表面糖蛋白，THY1的表達(dá)缺失可致腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。研究表明P53在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中表達(dá)異常增高，而在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中表達(dá)正常。因此探討不同級(jí)別卵巢漿液性腺癌的發(fā)病機(jī)制和生物學(xué)行為的異

5、同，對(duì)于卵巢癌的合理有效的綜合治療是非常必要的。本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)卵巢低級(jí)別和高級(jí)別漿液性腺癌中抑癌基因NPRL2、RKIP、THY1和P53蛋白表達(dá)情況，結(jié)合卵巢漿液性腺癌二元論對(duì)比分析表達(dá)的差異和意義，同時(shí)進(jìn)一步檢測(cè)上述指標(biāo)在正常卵巢上皮、卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤、卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)變化，對(duì)比分析在卵巢高級(jí)別和低級(jí)別漿液性腺癌發(fā)生中的可能作用和臨床意義。以期進(jìn)一步闡明卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌的發(fā)病機(jī)

6、制，為不同級(jí)別漿液性腺癌的預(yù)后判斷和綜合治療提供參考。
　　 方法:選取2003年1月至2007年6月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院臨床資料完整、經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的卵巢漿液性腺癌標(biāo)本61例，其中高級(jí)別41例，低級(jí)別20例。卵巢漿液性囊腺瘤47例，卵巢交界性漿液性囊腺瘤9例。另取正常卵巢上皮組織10例及正常輸卵管組織10例做為對(duì)照。應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，檢測(cè)NPRL2/RKIP/THY1/P53在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌、卵巢漿液性交界

7、性腫瘤、卵巢漿液性囊腺瘤中的表達(dá)情況，分析其在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中的作用和臨床意義;檢測(cè)上述指標(biāo)在高級(jí)別中的表達(dá)情況，分析其在高級(jí)別中的作用和臨床意義。在此基礎(chǔ)上，對(duì)比分析上述指標(biāo)在卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)差異和意義。
　　 免疫組化采用二步法，常規(guī)制作蠟塊標(biāo)本，根據(jù)二步法檢測(cè)試劑盒的步驟進(jìn)行。其他條件不變，以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。采用SPSS13.0版軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用X2檢驗(yàn)，Kaplan-

8、Meier單因素生存分析，Log-Rank檢驗(yàn)比較生存率間有無(wú)差別，Cox多因素生存分析比較各指標(biāo)對(duì)預(yù)后的影響程度。
　　 結(jié)果:
　　 1.病理形態(tài)學(xué)特征描述
　　 卵巢漿液性囊腺瘤，呈囊性、乳頭狀或腺纖維瘤樣，囊腔或乳頭表面被覆單層類似輸卵管粘膜纖毛細(xì)胞的瘤細(xì)胞，無(wú)增生及異型性。卵巢漿液性交界性囊腺瘤，囊腔或乳頭表面被覆的上皮細(xì)胞增生，層次增多，排列紊亂，細(xì)胞核出現(xiàn)輕度-中度的非典型性，有少量核分裂像。

9、>　　 卵巢漿液性腺癌，癌細(xì)胞呈不規(guī)則腺管狀，乳頭狀或?qū)嵭耘帕?，有明顯的非典型性，并伴有大量核分裂像。根據(jù)細(xì)胞核的異型程度及核分裂象計(jì)數(shù)，分為低級(jí)別與高級(jí)別。低級(jí)別癌細(xì)胞大小一致，呈圓形或卵圓形，大小均一，染色質(zhì)勻細(xì)，細(xì)胞核輕-中度異型性，核分裂象≤12個(gè)/10HPF;高級(jí)別癌細(xì)胞大小不一，呈卵圓形或形態(tài)不規(guī)則，可見奇異形核，染色質(zhì)粗，細(xì)胞核異型明顯（核大小差異≥3∶1），核分裂象＞12個(gè)/10HPF。兩者分級(jí)均不考慮間質(zhì)有無(wú)浸潤(rùn)。<

10、br>　　 2.卵巢漿液性腺癌中P53的表達(dá)情況
　　 在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中P53的陽(yáng)性表達(dá)率為25％，在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率為78％。P53在低級(jí)別組的陽(yáng)性表達(dá)率低于高級(jí)別組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.NPRL2/RKIP/THY1在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)情況
　　 3.1NPRL2表達(dá)情況:NPRL2在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌、交界性囊腺瘤和囊腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為50％

11、，55.6％和70.2％。統(tǒng)計(jì)分析表明低級(jí)別組與正常和囊腺瘤組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其余各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.2RKIP表達(dá)情況:卵巢低級(jí)別漿液性腺癌、交界性囊腺瘤和囊腺瘤中RKIP的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60％、66.7％和83％。低級(jí)別組RKIP的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常和囊腺瘤組(P＜0.05)，其余各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.3THY1表達(dá)情況:THY1在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌、交界性

12、囊腺瘤和囊腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為55％、55.6％和83％。統(tǒng)計(jì)分析表明低級(jí)別組陽(yáng)性率明顯低于正常和囊腺瘤組(P＜0.05)，其余各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.NPRL2/RKIP/THY1在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)情況
　　 4.1NPRL2在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為29.3％，與正常輸卵管上皮組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 4.2卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中RKIP的陽(yáng)性表達(dá)率為1

13、7.1％，明顯低于正常輸卵管組(P＜0.05)。
　　 4.3THY1在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為14.6％，與正常輸卵管上皮組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P＜0.05)。
　　 5.卵巢高級(jí)別和低級(jí)別漿液性腺癌中RKIP/THY1表達(dá)的對(duì)比研究
　　 高級(jí)別組中THY1的陽(yáng)性表達(dá)率為14.6％，明顯低于低級(jí)別組(55％)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);RKIP在高級(jí)別組中的陽(yáng)性表達(dá)率為17.1％,與

14、低級(jí)別組(60％)比明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 6.高級(jí)別和低級(jí)別漿液性癌生存分析與NPRL2/RKIP/THY1表達(dá)的關(guān)系
　　 6.1卵巢高級(jí)別漿液性腺癌3年和5年生存率分別是34.1％和12.2％，卵巢低級(jí)別漿液性腺癌3年和5年生存率分別是85％和70％，低級(jí)別組和高級(jí)別組之間3年和5年生存率均有差別(P＜0.05)。
　　 6.2卵巢低級(jí)別漿液腺癌中，P53陽(yáng)性和陰性表達(dá)者3年生存率分

15、別為40％和100％，5年生存率分別為20％和86.1％，兩組比較均有差別;NPRL2陽(yáng)性和陰性表達(dá)者3年生存率分別為100％和70％，5年生存率分別為100％和40％，前者無(wú)差別，后者有差別;RKIP陽(yáng)性和陰性表達(dá)者3年生存率分別為91.7％和75％，5年生存率分別為91.7％和37.5％，前者無(wú)差別，后者有差別;THY1陽(yáng)性和陰性表達(dá)者3年生存率分別為100％和66.7％，5年生存率分別為90.9％和44.4％，兩組比較均有差別。<

16、br>　　 6.3卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中，P53、RKIP和THY1陽(yáng)性表達(dá)者和陰性表達(dá)者之間3年生存率和5年生存率均無(wú)差別。
　　 7.NPRL2/RKIP/THY1表達(dá)與腹膜轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　 在高級(jí)別漿液性腺癌中，RKIP/THY1基因表達(dá)與腹膜轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān);在低級(jí)別漿液性腺癌中，NPRL2/RKIP/THY1基因表達(dá)與腹膜轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。
　　 8.卵巢低級(jí)別和高級(jí)別漿液性腺癌COX多因素生存分析
　　 卵

17、巢低級(jí)別漿液性腺癌中，5年生存率分析，只有分期進(jìn)入COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型(P=0.001)，分期較晚的患者是分期較早患者死亡風(fēng)險(xiǎn)的3.578倍。高級(jí)別中無(wú)能夠進(jìn)入COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型的因素。
　　 結(jié)論:
　　 1.NPRL2、RKIP和THY1在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌、卵巢交界性漿液性囊腺瘤及卵巢漿液性囊腺瘤中蛋白表達(dá)依次降低，提示三者可能參與了卵巢低級(jí)別漿液性腺癌的發(fā)病過程。
　　 2.卵巢高級(jí)別漿液性腺癌T

18、HY1和RKIP蛋白表達(dá)降低，而NPRL2無(wú)明顯變化，提示THY1和RKIP可能參與了高級(jí)別漿液性腺癌的發(fā)生。
　　 3.RKIP和THY1在高級(jí)別組與低級(jí)別組之間的陽(yáng)性表達(dá)率有差別，說明低級(jí)別和高級(jí)別的形成過程中可能有不同的分子通路。
　　 4.卵巢高級(jí)別漿液性腺癌3年和5年生存率明顯低于低級(jí)別。P53、RKIP和THY1的蛋白表達(dá)與高級(jí)別患者的生存率無(wú)關(guān)，而與低級(jí)別患者的生存率有關(guān)，提示三者對(duì)高級(jí)別患者預(yù)后判斷無(wú)參考