基于化學(xué)計量學(xué)的阿膠鑒別方法及黃芪譜效關(guān)系的研究.pdf

1、阿膠為馬科動物驢Equus asinus L.的干燥皮或鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠，在臨床上主要用于補(bǔ)血和改善微循環(huán)。阿膠傳統(tǒng)的鑒別方法經(jīng)驗(yàn)依賴性強(qiáng)，準(zhǔn)確度較低。核磁共振法(NMR)是將核磁共振現(xiàn)象應(yīng)用于測定分子結(jié)構(gòu)的一種譜學(xué)技術(shù)，獲得的圖譜信息非常豐富，因此基本上代表了中藥重要的整體化學(xué)組成，可以客觀、全面地反映中藥所含成分的特征。將NMR用于阿膠真?zhèn)舞b別的研究尚未見報道。因此，本課題采用NMR方法對中藥阿膠水提液成分進(jìn)行測定，結(jié)合

2、化學(xué)計量學(xué)方法對核磁共振圖譜進(jìn)行模式識別，初步建立了阿膠真?zhèn)舞b別的核磁共振方法。
　　 近年來關(guān)于中藥指紋圖譜與藥效的關(guān)系研究（即譜效關(guān)系）已有一些進(jìn)展，然而這些研究工作中大都采用HPLC指紋圖譜的色譜峰面積直接和藥效指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)。藥效活性與成分的含量密不可分，而峰面積的大小不能完全代表對應(yīng)成分實(shí)際含量的大小，因而基于色譜峰面積與基于成分實(shí)際含量建立的譜效關(guān)系是否等價值得進(jìn)一步探討。本課題針對上述存在問題，采用黃芪藥材標(biāo)準(zhǔn)品作為

3、研究對象，研究在何種條件下，以指紋圖譜峰面積代替成分實(shí)際含量進(jìn)行譜效關(guān)系研究是等價的;在此基礎(chǔ)上首先選用黃芪藥材作為研究對象，以清除自由基活性為藥效指標(biāo)，對黃芪藥材譜效關(guān)系進(jìn)行研究，挖掘與抗氧化活性顯著相關(guān)的特征峰，并為重要特征峰進(jìn)行定性分析;其次進(jìn)一步研究了黃芪多糖、黃芪黃酮類成分以及黃芪其它成分提取物HPLC指紋圖譜與抗疲勞作用之間的譜效關(guān)系，為黃芪藥材的質(zhì)量控制和評價提供了參考依據(jù)。
　　 本論文工作的研究內(nèi)容主要分為以下

4、幾個方面:
　　 1、測定了東阿阿膠、福膠、古井阿膠和偽品阿膠水溶性成分的1H-NMR圖譜，通過把1H-NMR圖譜分成不同的局部間隔區(qū)域，在優(yōu)化后的局部間隔區(qū)域上進(jìn)行PLS分析，準(zhǔn)確地鑒別了阿膠真品和偽品;對該圖譜區(qū)域所反映的物質(zhì)成分信息進(jìn)行了分析，結(jié)合參考文獻(xiàn)，推測阿膠真品和偽品的物質(zhì)成分差異可能來自丙氨酸，亮氨酸，賴氨酸，精氨酸，谷氨酸和脯氨酸。
　　 2、以5種黃芪藥材標(biāo)準(zhǔn)品作為研究對象，進(jìn)行5因素、4水平的正交實(shí)

5、驗(yàn)設(shè)計，獲得各次實(shí)驗(yàn)組合HPLC指紋圖譜和清除DPPH自由基活性。分別以指紋圖譜峰面積和成分實(shí)際含量對藥效指標(biāo)進(jìn)行多元線性回歸分析，并嘗試從理論上探討在何種條件下，以指紋圖譜峰面積代替成分實(shí)際含量進(jìn)行譜效關(guān)系研究是等價的。結(jié)果表明:只要峰面積和對應(yīng)成分實(shí)際含量的線性關(guān)系良好，可以采用色譜峰面積代替成分的實(shí)際含量進(jìn)行譜效關(guān)系研究。
　　 3、對不同產(chǎn)地黃芪和其提取條件采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計，分別測定各次實(shí)驗(yàn)的HPLC指紋圖譜和清除DPP

6、H自由基的能力，采用偏最小二乘回歸(PLSR)對黃芪藥材指紋圖譜與抗氧化活性相互關(guān)系進(jìn)行研究。結(jié)果表明:黃芪中多數(shù)化學(xué)成分具有清除DPPH自由基的能力;采用HPLC-DAD-MS聯(lián)用技術(shù)對部分色譜峰進(jìn)行定性分析，根據(jù)色譜峰的質(zhì)譜圖和紫外光譜確定了7個色譜峰表征的可能成分，分別為毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花苷、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、2′-羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖

7、苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素和3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷。
　　 4、采用適當(dāng)提取方法，獲得黃芪多糖、黃芪黃酮類成分以及黃芪其他類成分提取物，以三類提取物為考察對象，選用U*11(114)均勻設(shè)計表安排實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行了抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)（小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)），并測定均勻設(shè)計表中各實(shí)驗(yàn)組合的黃芪黃酮類成分、黃芪其他類成分的HPLC指紋圖譜及黃芪總多糖含量，采用正交信號校正-偏最小二乘法(OSC-PLS)分析了黃芪提取物HPLC圖譜與抗疲

8、勞作用之間的譜效關(guān)系，結(jié)果表明:黃芪中黃酮類與其他類成分的色譜峰對抗疲勞呈增強(qiáng)作用，而黃芪多糖呈減弱作用。通過色譜峰的質(zhì)譜圖和紫外光譜，結(jié)合文獻(xiàn)，確定了9個色譜峰可能的對應(yīng)成分，分別為芳香膜菊素-7-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷-6″-O-丙二酸酯、毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花苷、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、2′-羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄