暗黑鰓金龜嗅覺基因的鑒定及特征分析.pdf

1、C l a s s i f i e dI n d e x ：C o n f i d e n t i a l ( y e s ／n o ) ：n oC o d e ：1 0 2 2 4N 0 ．： 1 3 0 3 1 0 1 5 5D i s s e r t a t i o nf o r t h e M a s t e r D e g r e eI d e n t i f i c a t i o na n d F u n c t i o

2、n a l A n a l y s i s o ft h eO l f a c t o r yG e n e s i nH o l o t r i c h i ap a r a l l e l a ( C o l e o p t e r a - ．M e l o l o n t h i d a e )C a n d i d a t e ：F a n g C h i q i nS u p e r V i s o r ：P r o f ．F

3、 a n D o n gD e g r e eC a t e g o r y ：M a s t e r o f A g r i c u l t u r eC o l l e g e ：A g r o n o m y A c a dF i r s tl e v e ld i s c i p l i n e ：P l a n tP r o t e c t i o nS e c o n d l e v e ld i s c i p l i n

4、 e ：A g r i c u l t u r a lE n t o m o l o g y a n dP e s tC o n t r o lH a r b i n C h i n aJ u n e 2 0 1 6東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學碩上學位論文2 ．4 ．5 P C R 產(chǎn)物的回收與純化????????????????????????．2 32 ．4 ．6 基因片段的連接???????????????????????????一2 32

5、．4 ．7 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞及陽性克隆驗證????????????????．．2 32 ．5H p a r O B P l 5 a 基因的原核表達及蛋白純化?????????????????一2 42 ．5 ．1 質(zhì)粒提取??????????????????????????????．2 42 ．5 ．2 原核表達載體的構(gòu)建?????????????????????????～2 52 ．5 ．3 H p a r O B P l 5

6、a 蛋白的誘導條件摸索????????????????????2 52 ．5 ．4S D S —P A G E 電泳檢測?????????????????????????一2 62 ．5 ．5 蛋白的純化?????????????????????????????．2 72 ．6 熒光競爭結(jié)合試驗???????????????????????????2 83 結(jié)果與分析???????????????????????????????．3 0

7、3 ．1 暗黑鰓金龜雌蟲觸角和足轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析?????????????????．3 03 ．1 ．1 暗黑鰓金龜雌蟲觸角和足轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)概況????????????????．．3 03 ．1 ．2 暗黑鰓金龜雌蟲觸角和足轉(zhuǎn)錄組U n i g e n e 的K O G 分析???????????3 13 ．1 ．3 暗黑鰓金龜雌蟲觸角和足轉(zhuǎn)錄組U n i g e n e 的G O 分類????????????3 13 ．2 嗅覺相關(guān)基因注

8、釋與分析????????????????????????3 43 ．2 ．1 暗黑鰓金龜氣味結(jié)合蛋白H p a r O B P 的識別????????????????3 43 ．2 ．2 暗黑鰓金龜化學感受蛋白H p a r C S P 的識別????????????????4 l3 ．2 ．3 暗黑鰓金龜感覺神經(jīng)元膜蛋白H p a r S N M P 的識別?????????????．4 13 ．2 ．4 暗黑鰓金龜氣味受體H p a

9、 r O R 的識別??????????????????一4 33 ．2 ．5 暗黑鰓金龜離子型受體H p a r l R 的識別??????????????????4 63 ．3H p a r O B P l 5 a 基因全長的克隆??????????????????????．4 93 ．3 ．1 暗黑鰓金龜觸角、足總R N A 檢測????????????????????4 93 ．3 ．2H p a r O B P l 5 a 序

10、列擴增????????????????????????．．5 03 ．3 ．3 H p a r O B P l 5 a 和p G E M —T 4 重組質(zhì)粒P C R 檢測???????????????5 03 ．3 ．4 原核表達載體構(gòu)建??????????????????????????一5 l3 ．4H p a r O B P l 5 a 基因序列分析???????????????????????．5 23 ．4 ．1 H p a

11、 r O B P l 5 a 基因序列分析??????????????????????一5 23 ．4 ．2H p a r O B P l 5 a 預(yù)測蛋白理化性質(zhì)分析???????????????????5 33 ．4 ．3 H p a r O B P l 5 a 預(yù)測蛋白的疏水性分析???????????????????5 33 ．4 ．4H p a r O B P l 5 a 蛋白氨基酸序列及系統(tǒng)發(fā)育分析?????????????

12、??5 43 ．4 ．5 H p a r O B P l 5 a 基因的組織分布及相對表達量????????????????5 63 ．5H p a r O B P l 5 a 基因原核表達及蛋白純化??????????????????一5 73 ．5 ．1 H p a r O B P l 5 a 重組質(zhì)粒的構(gòu)建?????????????????????．．5 73 ．5 ．2 重組質(zhì)粒p E T 3 0 一H p a r O B P