BMP-7在肝臟的表達(dá)及其可能作用.pdf

1、目的:旨在通過(guò)研究BMP-7在SD大鼠肝纖維化模型、肝衰竭模型及SD大鼠的HSCs及HCs、慢性肝炎、肝硬化、肝癌等慢性HBV感染者的表達(dá)規(guī)律，及給予重組人BMP-7及重組人TGF-β1干預(yù)體外培養(yǎng)HSCs、HCs及HepG2細(xì)胞的增殖，發(fā)現(xiàn)BMP-7在肝臟的表達(dá)規(guī)律及其可能作用。 方法:采用原位灌流消化及密度梯度離心的方法獲得原代SD大鼠的HSCs。采用原位灌流消化及使用Percoll分離液純化的方法獲得原代SD大鼠的HCs。

2、通過(guò)體外培養(yǎng)的方法獲得傳代SD大鼠的HSCs。采用腹腔注射40﹪四氯化碳制作SD大鼠肝纖維化模型。采用D-氨基半乳糖一次腹腔注射制成大鼠急性肝衰竭模型。 所有模型經(jīng)檢測(cè)肝功能、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白(laminin，LN)等指標(biāo)及病理學(xué)檢查證實(shí)構(gòu)建成功。通過(guò)肝穿刺活檢或肝移植離體后即刻取材的方法獲得慢性HBV感染病人的肝組織標(biāo)本。正常人肝組織取自肝移植供肝術(shù)前常規(guī)制作的病理蠟塊。通過(guò)RT-PCR及凝膠電泳圖像分析，分析BMP-1至

3、BMP-7 nRNA在肝臟的表達(dá)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析BMP-7 mRNA在正常大鼠、肝纖維化模型、急性肝衰竭模型的表達(dá)。采用Western Blot證實(shí)BMP-7在SD大鼠肝臟的表達(dá)。對(duì)56例慢性HBV感染者及5例正常對(duì)照肝組織按病理診斷分組。進(jìn)行BMP-7的免疫組織化學(xué)染色，觀察光鏡下分布特點(diǎn)，并取部分標(biāo)本進(jìn)行圖像分析。取4例重型肝炎肝組織、8例肝癌患者癌結(jié)節(jié)及3例癌旁組織進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR，檢測(cè)BMP-7 m

4、RNA的表達(dá)。并采用Western Blot分析BMP-7在重型肝炎及肝癌患者肝組織的表達(dá)。體外培養(yǎng)HSCs、HCs及}]epG2細(xì)胞，并給予重組人BMP-7及重組人TGF-β1處理，采用MTT法分別測(cè)定3種細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果:BMP-1、BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7在正常SD大鼠肝臟、SD大鼠肝纖維化模型肝組織、正常SD大鼠新鮮分離肝星狀細(xì)胞中均有表達(dá)；且在肝纖維化模型肝組織中表達(dá)增加；在SD大

5、鼠肝衰竭模型肝組織中BMP—1、BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-7表達(dá)減少，BMP-6未見(jiàn)明顯表達(dá)。BMP—1、BMP-2、BMP-7在正常SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞有表達(dá)。Western Blot結(jié)果顯示BMP-7在正常及肝纖維化模型SD大鼠肝臟均有表達(dá)。 免疫組織化學(xué)及圖像分析顯示BMP-7陽(yáng)性單位在正常人肝臟、病毒性肝炎(乙型)慢性輕度、中度、重度患者肝臟有逐漸增加趨勢(shì)，在重型肝炎、肝硬化患者肝臟較病毒性肝炎(乙型

6、)慢性中度、重度患者低；進(jìn)-步比較BMP-7陽(yáng)性區(qū)灰度有相似結(jié)果。BMP-7在肝臟既有胞漿型表達(dá)，也有胞膜型表達(dá)。在慢性中度、重度患者及肝硬化結(jié)節(jié)內(nèi)為彌漫性表達(dá)；但在重型肝炎患者，僅呈灶狀表達(dá)。Western Blot證實(shí)BMP-7在重型肝炎及肝癌患者肝組織均有表達(dá)。 TGF-β1對(duì)人星狀細(xì)胞LX-2增殖有抑制作用，BMP-7可以拮抗這種抑制作用。 BMP-7對(duì)SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。 BMP-7在

7、癌周組織有彌漫或灶狀表達(dá)，在癌結(jié)節(jié)表達(dá)極少。TGF-β1對(duì)體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞增殖有輕度抑制作用。BMP-7對(duì)體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。TGF-β1在培養(yǎng)24小時(shí)可以部分抑制BMP-7對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用，在培養(yǎng)48小時(shí)抑制作用消失。 結(jié)論: 1．BMP1、BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7在SD大鼠肝臟、新鮮分離星狀細(xì)胞中均有表達(dá)，且在肝纖維化模型肝組織中表達(dá)增加、在肝衰

8、竭模型肝組織中表達(dá)減少。BMP-1、BMP-2、BMP-7在正常SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞有表達(dá)。 2．BMP-7在人肝組織有表達(dá)，且在慢性乙型肝炎患者肝組織中表達(dá)增多；在重型肝炎(肝功能衰竭)肝組織中表達(dá)減少。 3．TGF-β1對(duì)人肝星狀細(xì)胞系LX-2增殖有抑制作用，BMP-7可以拮抗這種抑制作用。 4．BMP-7對(duì)SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。 5． BMP-7在人肝癌結(jié)節(jié)中表達(dá)極少。對(duì)體外培養(yǎng)的