華支睪吸蟲(chóng)六個(gè)未知基因的識(shí)別及PGK1和PGK2的生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的:通過(guò)篩選華支睪吸蟲(chóng)成蟲(chóng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)，發(fā)現(xiàn)并識(shí)別未知的全長(zhǎng)基因。在此基礎(chǔ)上，對(duì)新發(fā)現(xiàn)的華支睪吸蟲(chóng)磷酸甘油酸激酶同工酶基因進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化分析，并研究其生物學(xué)活性：包括免疫原性、免疫反應(yīng)性，組織分布，酶活性及對(duì)肝癌生長(zhǎng)的抑制作用。同時(shí)研究這兩個(gè)同工酶在蟲(chóng)體中的差異表達(dá)和進(jìn)化分析，以探討這兩個(gè)同工酶在華支睪吸蟲(chóng)中的作用和可能的應(yīng)用價(jià)值。 結(jié)論:1.通過(guò)篩選華支睪吸蟲(chóng)成蟲(chóng)cDNA文庫(kù)，獲得6個(gè)具有完整開(kāi)放閱讀框的全長(zhǎng)cDN

2、A序列，經(jīng)生物信息學(xué)分析初步鑒定為華支睪吸蟲(chóng)乙醛脫氫酶基因(CsALDH)，半胱氨酸蛋白酶基因(CsCP)，3-磷酸甘油醛脫氫酶1基因(CsGAPDH1)，3-磷酸甘油醛脫氫酶2基因(CsGAPDH2)，3-磷酸甘油酸激酶1基因(CsPGK1)和3-磷酸甘油酸激酶2基因(CsPGK2)，同時(shí)對(duì)它們的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行了鑒定和預(yù)測(cè)。2.成功構(gòu)建了六個(gè)原核表達(dá)載，成功表達(dá)出CsPGK1、CsPGK2、CsCP、CsALDH、CsGAPDH1和C

3、sGAPDH2融合蛋白。并成功純化出CsPGK1和CsPGK2蛋白。3.純化的CsPGK1和CsPGK2蛋白均具有磷酸甘油酸激酶的活性，同時(shí)它們還具有抑制肝癌腫瘤及腹水的增長(zhǎng)，具有潛在的藥用價(jià)值。4.CsPGK1和CsPGK2在蟲(chóng)體分布廣泛，其中以PGK1表達(dá)為主，這也證明PGK是華支睪吸蟲(chóng)的重要物質(zhì)，糖酵解是華支睪吸蟲(chóng)獲得能量的重要方式。它們能被病人血清所識(shí)別，是潛在的抗原診斷分子。5.PGK序列高度保守，可以用來(lái)進(jìn)行種系發(fā)生的研究和