肝再生增強因子促進肝再生的信號途徑研究.pdf

1、目的：動物實驗已證明ALR可促進肝再生，但體外細胞實驗對ALR能否直接使肝細胞增殖存在相反的結(jié)果。對ALR在促進肝再生過程中和其它肝源性細胞因子的相互關(guān)系仍不完全清楚。本研究擬以鼠肝大部切除(PH)動物模型結(jié)合體外細胞實驗，探討ALR間接促進肝再生的可能信號途徑。 材料與方法：1．肝再生率評價ALR對小鼠肝大部切除(PH)后肝再生的影響；2．MTT檢測ALR與肝再生大鼠血清協(xié)同對肝細胞增殖、ALR拮抗TGF-β1抑制肝細胞增殖、

2、Kupffer或Ito細胞條件培養(yǎng)液(KCCM+／ICCM+)對肝細胞增殖以及ALR對Ito細胞增殖的影響；3．免疫組織化學觀察肝再生過程中ALR的表達變化、ALR是否結(jié)合于KC細胞膜表面、ALR對KC中IL-6和TGF-βl的表達和對Ito細胞中TGF-ct表達以及對經(jīng)TGF-βl刺激后Ito細胞中a-SMA表達的影響；4．放免法檢測ICCM+中TGF-α的含量；5.免疫細胞化學和Westernblot檢測ALR對Ito細胞中TGF-

3、β1表達和外源性ALR對肝細胞中ALR自身表達的影響。 結(jié)果：1．ALR可促進小鼠PH后肝再生；且能協(xié)同肝再生大鼠血清促進肝細胞增殖；2．ALR主要分布于正常肝細胞胞漿內(nèi)，大鼠PH后第2d和3d，肝臟中ALR免疫反應(yīng)陽性信號減弱消失，第6d基本恢復(fù)正常；3．ALR能拮抗TGF-Dl抑制肝細胞增殖的作用；4．外源性ALR能使肝細胞中ALR表達的增高；5．KCCM+／ICCM+能明顯促進肝細胞增殖；6．KC細胞膜表面可能存在ALR結(jié)

4、合位點或受體；7．ALR能增加KC中的IL-6和Ito細胞中的TGF-α的表達而抑制KC和Ito細胞中TGF-βl的表達；放免測定顯示ICCM+中TGF-ct含量增高；8．ALR可抑制Ito細胞增殖和降低經(jīng)TGF-β1激活后，Ito細胞中α-SMA的表達量。 結(jié)論：1．ALR可能以自分泌方式釋放，與肝再生相關(guān)因子相互影響如：抑制TGF-β1生物活性，間接促進肝再生；2．ALR可通過直接作用于KC和Ito細胞，使KC中IL-6表達