液相芯片技術(shù)檢測(cè)超排卵患者卵泡液中細(xì)胞因子水平的研究.pdf

1、研究背景:
　　 不孕癥在所有夫婦中的發(fā)病率介于10％～17％。作為解決不孕、不育癥行之有效的方法，輔助生育技術(shù)(ART)是近幾十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的具有較大前景的一門新技術(shù)，其中最具代表性的是體外受精-胚胎移植(IVF-ET)及單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI)。
　　 目前已知的影響IVF-ET臨床妊娠結(jié)局的因素主要包括卵子質(zhì)量、女方年齡、IVF周期數(shù)、移植胚胎數(shù)、注射人絨毛膜促性腺激素日(hCG日)血清雌二醇(E2)、孕酮(

2、P)濃度、獲卵數(shù)及某些不孕病因的影響等。盡管隨著ART的發(fā)展，臨床妊娠率已得到較大提高，但總體而言仍有過(guò)半數(shù)的周期未獲成功，因此影響IVF-ET臨床妊娠率的因素仍有待進(jìn)一步研究。
　　 作為輔助生殖技術(shù)個(gè)中配子之一的卵子，其生長(zhǎng)、成熟是受內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌因子調(diào)節(jié)的復(fù)雜過(guò)程。卵泡液(FF)含甾體激素和細(xì)胞因子等各種因子，提供卵子成熟的微環(huán)境，在卵子發(fā)育、成熟和排出過(guò)程中起重要作用，甚至可能影響以后的受精、早期胚胎發(fā)育及植入。

3、盡管每種細(xì)胞因子的確切作用尚未完全清楚，大量的證據(jù)提示它們的相互作用對(duì)卵子發(fā)育成熟起重要作用。卵泡液中某些細(xì)胞因子可能可以成為IVF-ET臨床妊娠結(jié)局預(yù)測(cè)的標(biāo)志物。
　　 既往由于技術(shù)所限，無(wú)法高通量檢測(cè)多種細(xì)胞因子的水平，現(xiàn)在通過(guò)液相芯片技術(shù)可能可以達(dá)到這樣的目的，從而為進(jìn)一步評(píng)價(jià)其與妊娠結(jié)局的關(guān)系提供基礎(chǔ)。將液相芯片技術(shù)應(yīng)用于多種細(xì)胞因子水平的同時(shí)檢測(cè)，有助于全面判斷機(jī)體免疫功能、了解分子水平的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。因此，本研究擬利

4、用液相芯片技術(shù)檢測(cè)控制性超促排卵(COH)患者卵泡液中36種不同細(xì)胞因子的水平，探討檢測(cè)的可行性，并試圖尋找與臨床妊娠成功有關(guān)的細(xì)胞因子。
　　 研究目的:
　　 初步評(píng)價(jià)液相芯片技術(shù)用于檢測(cè)COH患者取卵時(shí)卵泡液中36種細(xì)胞因子水平的可行性，比較不同妊娠結(jié)局患者行IVF-ET周期中一般情況及卵泡液中各種細(xì)胞因子水平的差異，以尋找潛在的與獲得臨床妊娠有關(guān)的細(xì)胞因子，為尋找可以預(yù)測(cè)妊娠與否的標(biāo)志物打下基礎(chǔ)。
　　

5、研究對(duì)象與方法:
　　 1、選取2008.3-2008.7因各種不孕病因在孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院生殖中心接受IVF-ET治療的患者，共81名，包括輸卵管因素59例(單純輸卵管因素34例，單側(cè)或雙側(cè)輸卵管積液者15例，雙側(cè)輸卵管切除者10例)，PCOS患者14例，子宮內(nèi)膜異位癥患者8例。
　　 2、對(duì)象接受病史詢問(wèn)、體格檢查及B超檢查(經(jīng)陰道)，取靜脈血檢測(cè)相關(guān)激素水平，COH、取卵術(shù)及胚胎移植。同時(shí)采用液相芯片技術(shù)檢測(cè)患者單一卵

6、泡卵泡液中36種細(xì)胞因子水平。
　　 3、應(yīng)用液相芯片技術(shù)檢測(cè)結(jié)果初步評(píng)價(jià)其用于檢測(cè)卵泡液中36種細(xì)胞因子水平的可行性；比較不同妊娠結(jié)局患者行IVF-ET周期中一般情況及卵泡液中各種細(xì)胞因子水平的差異，尋找潛在的與獲得臨床妊娠有關(guān)的細(xì)胞因子。
　　 研究結(jié)果:
　　 1、IL-5、IP-10、Leptin、MIP-1β和VEGF在所有的81個(gè)標(biāo)本中檢測(cè)到；FGFbasic、GM-CSF、IL-2、IL-4、IL-

7、10、IL-13、IL-17、MCP-3、NGF、PDGF、TNF-β因濃度低于檢測(cè)低限，在所有的標(biāo)本中均未測(cè)出確切檢測(cè)結(jié)果。BLC、ENA-78、Eotaxin、G-CSF、GRO-α、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-7、IL-8、IL12P40、IL12P70、IL-15、IL-17F、MCP-1、MIP-1α、RANTES、TNF-α分別在69.1、35.8、92.6、58.0、85.2、7.4、

8、97.5、1.2、25.9、75.3、13.6、1.2、92.6、23.5、17.3、3.7、91.4、3.7、95.1、1.2％的標(biāo)本中檢測(cè)到。
　　 2、結(jié)合樣本細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果范圍評(píng)價(jià)，Eotaxin、GM-CSF、IL-10、IL12P40、IL12P70、IL-17F、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IP-10、Leptin、MCP-3、MIP-1β、NGF、TNF-

9、α、TNF-β、VEGF的各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的偏倚度(DEV)及平均DEV均在允許范圍內(nèi)，可認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合程度較好，檢測(cè)的準(zhǔn)確度較高。
　　 3、IL-10、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、Leptin、MIP-1β、TNF--β、VEGF標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)檢測(cè)的變異系數(shù)在允許范圍內(nèi)，可以認(rèn)為上述各細(xì)胞因子測(cè)量的可重復(fù)性較好；而ENA78、Eotaxin、IL12P40、IL-15、IL-1RA、IL-2、IL-7、IP-10、NGF、

10、PDGF-BB、TNF-α則存在1個(gè)或以上的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)檢測(cè)值變異系數(shù)大于15％；BLC、FGFbasic、G-CSF、GM-CSF、GRO-α、IFN-γ、IL12P70、IL-13、IL-17、IL-17F、IL-1α、IL-8、MCP-1、MCP-3、MIP-1α、RANTES則在取值的低限范圍內(nèi)出現(xiàn)明顯突出值，無(wú)法計(jì)算低限標(biāo)準(zhǔn)樣品的變異系數(shù)。
　　 4、對(duì)12個(gè)樣本的卵泡液標(biāo)本進(jìn)行雙份檢測(cè)，計(jì)算測(cè)量結(jié)果變異系數(shù)(CV)、均數(shù)及

11、差異標(biāo)準(zhǔn)差，Eotaxin、GRO-α、IL-1α、IL-5、IP-10、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、RANTES、VEGF的平均變異系數(shù)在允許范圍，提示檢測(cè)的可重復(fù)性較好，精密度較高。BLC、ENA78、G-CSF、IL12P40、IL-1RA、IL-6、IL-7的檢測(cè)結(jié)果平均變異系數(shù)超出允許范圍。
　　 5、未臨床妊娠組及臨床妊娠組間在基礎(chǔ)LH、hCG日P的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示較未臨床妊娠組，臨床妊娠組基礎(chǔ)LH

12、及hCG日P較低，余各臨床資料及卵泡液中細(xì)胞因子水平(IL-5、Leptin、MIP-1β、VEGF)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1、液相芯片技術(shù)可用于檢測(cè)卵泡液中細(xì)胞因子水平，但仍須進(jìn)一步完善檢測(cè)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)及提高檢驗(yàn)靈敏度，使可檢測(cè)的卵泡液中目的細(xì)胞因子范圍擴(kuò)大。
　　 2、基于檢測(cè)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)及靈敏度的限制，研究結(jié)果初步提示卵泡液中IL-5、Leptin、MIP-1β、VEGF水平與IVF-ET臨