液相芯片技術檢測超排卵患者卵泡液中細胞因子水平的研究.pdf

1、研究背景:
　　 不孕癥在所有夫婦中的發(fā)病率介于10％～17％。作為解決不孕、不育癥行之有效的方法，輔助生育技術(ART)是近幾十年來發(fā)展起來的具有較大前景的一門新技術，其中最具代表性的是體外受精-胚胎移植(IVF-ET)及單精子卵胞漿內注射(ICSI)。
　　 目前已知的影響IVF-ET臨床妊娠結局的因素主要包括卵子質量、女方年齡、IVF周期數、移植胚胎數、注射人絨毛膜促性腺激素日(hCG日)血清雌二醇(E2)、孕酮(

2、P)濃度、獲卵數及某些不孕病因的影響等。盡管隨著ART的發(fā)展，臨床妊娠率已得到較大提高，但總體而言仍有過半數的周期未獲成功，因此影響IVF-ET臨床妊娠率的因素仍有待進一步研究。
　　 作為輔助生殖技術個中配子之一的卵子，其生長、成熟是受內分泌、自分泌和旁分泌因子調節(jié)的復雜過程。卵泡液(FF)含甾體激素和細胞因子等各種因子，提供卵子成熟的微環(huán)境，在卵子發(fā)育、成熟和排出過程中起重要作用，甚至可能影響以后的受精、早期胚胎發(fā)育及植入。

3、盡管每種細胞因子的確切作用尚未完全清楚，大量的證據提示它們的相互作用對卵子發(fā)育成熟起重要作用。卵泡液中某些細胞因子可能可以成為IVF-ET臨床妊娠結局預測的標志物。
　　 既往由于技術所限，無法高通量檢測多種細胞因子的水平，現在通過液相芯片技術可能可以達到這樣的目的，從而為進一步評價其與妊娠結局的關系提供基礎。將液相芯片技術應用于多種細胞因子水平的同時檢測，有助于全面判斷機體免疫功能、了解分子水平的免疫調節(jié)機制。因此，本研究擬利

4、用液相芯片技術檢測控制性超促排卵(COH)患者卵泡液中36種不同細胞因子的水平，探討檢測的可行性，并試圖尋找與臨床妊娠成功有關的細胞因子。
　　 研究目的:
　　 初步評價液相芯片技術用于檢測COH患者取卵時卵泡液中36種細胞因子水平的可行性，比較不同妊娠結局患者行IVF-ET周期中一般情況及卵泡液中各種細胞因子水平的差異，以尋找潛在的與獲得臨床妊娠有關的細胞因子，為尋找可以預測妊娠與否的標志物打下基礎。
　　

5、研究對象與方法:
　　 1、選取2008.3-2008.7因各種不孕病因在孫逸仙紀念醫(yī)院生殖中心接受IVF-ET治療的患者，共81名，包括輸卵管因素59例(單純輸卵管因素34例，單側或雙側輸卵管積液者15例，雙側輸卵管切除者10例)，PCOS患者14例，子宮內膜異位癥患者8例。
　　 2、對象接受病史詢問、體格檢查及B超檢查(經陰道)，取靜脈血檢測相關激素水平，COH、取卵術及胚胎移植。同時采用液相芯片技術檢測患者單一卵

6、泡卵泡液中36種細胞因子水平。
　　 3、應用液相芯片技術檢測結果初步評價其用于檢測卵泡液中36種細胞因子水平的可行性；比較不同妊娠結局患者行IVF-ET周期中一般情況及卵泡液中各種細胞因子水平的差異，尋找潛在的與獲得臨床妊娠有關的細胞因子。
　　 研究結果:
　　 1、IL-5、IP-10、Leptin、MIP-1β和VEGF在所有的81個標本中檢測到；FGFbasic、GM-CSF、IL-2、IL-4、IL-

7、10、IL-13、IL-17、MCP-3、NGF、PDGF、TNF-β因濃度低于檢測低限，在所有的標本中均未測出確切檢測結果。BLC、ENA-78、Eotaxin、G-CSF、GRO-α、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-7、IL-8、IL12P40、IL12P70、IL-15、IL-17F、MCP-1、MIP-1α、RANTES、TNF-α分別在69.1、35.8、92.6、58.0、85.2、7.4、

8、97.5、1.2、25.9、75.3、13.6、1.2、92.6、23.5、17.3、3.7、91.4、3.7、95.1、1.2％的標本中檢測到。
　　 2、結合樣本細胞因子檢測結果范圍評價，Eotaxin、GM-CSF、IL-10、IL12P40、IL12P70、IL-17F、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IP-10、Leptin、MCP-3、MIP-1β、NGF、TNF-

9、α、TNF-β、VEGF的各標準點的偏倚度(DEV)及平均DEV均在允許范圍內，可認為標準曲線的擬合程度較好，檢測的準確度較高。
　　 3、IL-10、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、Leptin、MIP-1β、TNF--β、VEGF標準點檢測的變異系數在允許范圍內，可以認為上述各細胞因子測量的可重復性較好；而ENA78、Eotaxin、IL12P40、IL-15、IL-1RA、IL-2、IL-7、IP-10、NGF、

10、PDGF-BB、TNF-α則存在1個或以上的標準點檢測值變異系數大于15％；BLC、FGFbasic、G-CSF、GM-CSF、GRO-α、IFN-γ、IL12P70、IL-13、IL-17、IL-17F、IL-1α、IL-8、MCP-1、MCP-3、MIP-1α、RANTES則在取值的低限范圍內出現明顯突出值，無法計算低限標準樣品的變異系數。
　　 4、對12個樣本的卵泡液標本進行雙份檢測，計算測量結果變異系數(CV)、均數及

11、差異標準差，Eotaxin、GRO-α、IL-1α、IL-5、IP-10、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、RANTES、VEGF的平均變異系數在允許范圍，提示檢測的可重復性較好，精密度較高。BLC、ENA78、G-CSF、IL12P40、IL-1RA、IL-6、IL-7的檢測結果平均變異系數超出允許范圍。
　　 5、未臨床妊娠組及臨床妊娠組間在基礎LH、hCG日P的差異有統(tǒng)計學意義，提示較未臨床妊娠組，臨床妊娠組基礎LH

12、及hCG日P較低，余各臨床資料及卵泡液中細胞因子水平(IL-5、Leptin、MIP-1β、VEGF)的差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1、液相芯片技術可用于檢測卵泡液中細胞因子水平，但仍須進一步完善檢測系統(tǒng)的評價及提高檢驗靈敏度，使可檢測的卵泡液中目的細胞因子范圍擴大。
　　 2、基于檢測系統(tǒng)的評價及靈敏度的限制，研究結果初步提示卵泡液中IL-5、Leptin、MIP-1β、VEGF水平與IVF-ET臨